196915. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és berendezés oldatban lévő egy vagy több komponens elkülönítésére kromatográfiás úton
15 196 915 16 A kapott eredményeket az 5. táblázat szemlélteti 5. táblázat SERONO-féle anti-hCG elkülönítése DEAE DE-52 adszorbensen Frakció száma O.D. RIA kötés % Frakció száma O.D. RIA kötés % 1 0,004 0,1 % 16 0,013 19 % 2 0,002 0,1% 17 0,039 16,4% 3 0,004 14,1% 18 0,03 5,0% 4 0,006 2,1% 19 0,012 3,0% 5 0,63 22,8% 20 0,019 6,4% 6 0,879 12,3% 21 0,044 10,3% 7 0,097 2,8% 22 0,029 4,5% 8 0,01 0,1% 23 0,018 4,0% 9 0,008 0,1% 24 0,015 3,0% 10 0,003 0,1% 25 0,008 2,6% 11 — 0,1% 26 0,002 2,4% 12 0,002 0,1% 27 0,002 0,1% 13 0,002 0,1% 28 0,01 0,1% 14 0,003 0,1% 29 — 0,1% 15 0,01 0,1% Amint az az 5. táblázat eredményeiből látható, három fő csúcsot kaptunk, az immunológiai aktivitás a proteinkoncentrációhoz viszonyítva igen nagy maradt. b) MILES-féle an ti-h CG tisztítása 70 pl antitestet (nyúl szérumot) az előzőleg azonos DEAE DE-52 oszlopra vittünk, és először 6,3 pH-értékű foszfát-pufferral eluáltuk. Mint az előző esetben, most is gyors proteincsúcsot eluáltunk a 3. és 4. frakciókban; az optikai sűrűség (O.D.) csökkenésével és a puffer pH-értékének 7,1-re változtatásával három másik főcsúcsot kaptunk. Az eredményeket a 6. táblázat szemlélteti. 6. táblázat MILES-féle anti-hCG elkülönítése DEAE DE-52 adszorbensen Frakció száma O.D. RIA kötés % Protein A* kötés % 1 0,01 0,1% — 2 0,102 0,1% — 3 0,656 64,2% 2,6% 4 0,416 45,6% — 5 0,091 0,1% — 6 0,055 0,1% — 7 0,044 0,1% — 8 0,022 0,1% — 9 0,016 0,1% — 10 0,007 0,1% — 11 0,005 0,1% — 12 0,003 0,1% — 6. táblázat folytatás Frakció száma O.D. RIA kötés % Protein A* kötés % 13 0,003 0,1% — 14 0,004 0,1% — 15 0,001 0,1% — 16 0,004 0,1% — 17 0,011 0,1% — 18 0,034 65,4% 7,2% 19 0,291 55,5% 12,1% 20 0,247 61,4% 11,6% 21 0,094 63,6% 7,0% 22 0,042 64,8% 7,2% 23 0,041 63,4% — 24 0,07 1,0% — 25 0,518 60,3% 5,9% 26 0,518 67,7% 5,3% 27 0,299 55,5% 4,5% 28 0,161 58,4% 3,7% 29 0,120 66,0% 2,5% 30 0,112 54 % 1,8% 31 0,091 51,3% 3,9% 32 0,074 59,7% 2,4% 33 0,062 55,7% nem ismert 34 0,062 60,9% — 35 0,043 59,5% 1,9% 36 0,034 37 0,035 38 0,029 39 0,021 Amint az a 6 . táblázat eredményeiből kitűnik, az elkülönített anti-hCG-t három főcsúcsba kaptuk. Valamennyi immunológiai aktivitást mutatott, adszorpciót 280 nm-en és Protein A*-val kimutatható volt. Valamennyi csúcs élesen elvált egymástól ás ezeket izoláltuk. 8. példa Humán szérum szétválasztása Humán szérum szétválasztását dinamikus-oszlopos folyadékkromatográfia alkalmazásával végeztük a Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir, Md. Blackwell Scientific Publications, Oxford, London, 1973. 2. kiadás) eljárás szerint. A kromatográfia ioncserén alapszik, cellulóz adszorbensen és 5,7 pH-értékű, 0,02 M foszfát-pufferral végzett grádiens-eluálással. A 10 mm belső átmérőjű oszlopot megtöltjük 3 g DEAE DE-52 (védjegyzett Whatman gyártmány) adszorbenssel és 2,5 ml/perc áramlási sebesség mellett 8 pH-értékű foszfát-pufferral mossuk. A grádicnst két tartállyal hozzuk létre, 40 ml 3 pll-értékű foszfát-puffért és 60 ml 5,7 pH-értékű foszfát-puffért használva. 3 ml humán szérumot választottunk szét, 1,5 ml-es frakciókat szedve, amelyek proteintartalmát a 280 nm-en mért optikai sűrűség (O.D.) alapján állapítottunk meg. Az eredményeket a 7. táblázat szemlélteti. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
