196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 til-morfoliiit, 600 mg (1,15 mmól), a lentiek szerint előállított sztatin-glutaminsav-dibenzilészter-hidrokloridot, 261 mg (1,38 mmól) N-/t-butil-oxi-karboniI/-L-alanint és 732 mg (80%-os tisztaságú, 1,38 mmól) 1 -ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonátot. Az oldatot 19 órán keresztül 20 C’-on kevertetjük, majd az adott sorrendben 5%-os vizes sósavval, telített vizes NallCCr oldattal, és sóoldattal mossuk és MgSO^-tal, szárítjuk. Szűrés és bepárlás után 743 mg nyersterméket kapunk habos anyag formájában. 1H-NMR (CDCI3): 5,2 (s, 2H, benzil CH2). B--G) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-alanin-sztatin-glu tainsav-dibenzilészter kívánt végtermék előállítását az 1. példa B-G) rcakciólépéscinél leírtak alapján végezzük. 743 mg, az előző, A) lépésnél előállított (N-/t-butil-oxi-karbonil/-alanin)-sztatin-glutaminsav-dibenziIésztert átalakítva a kívánt termékké. 300 mg termékhez jutunk hab formájában. 1 H- NMR (CDCI3): 5,2 (s, 2H, benzil CH2). Valamennyi lépésnél, ahol a védőcsoportot eltávolítjuk, a száraz bepárlási maradékot éterben dörzsöljük el. Az E) reakciólépés végénél a nyerstermékként kapott habot szilikagélen történő kromatografálással tisztítjuk, eluensként kloroform/metanol, 95 : 5 oldószerelcgyet használva. Tisztított termékként ugyancsak habot kapunk. A G) lépés végénél nem végzünk kromatográfiás tisztítást. 7. példa Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-alanin-sztatin-glutaminsav előállítását a következő reakciólépésen keresztül végezzük 90 mg (0,077 mól) (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenil-alanin)-hisz tidin-sz. tatin-alanin-sztatin-glutaminsav-dibenzilészterből, 45 mg 20%-os PdíOllWC katalizátorból és 10 ml metanolból álló reakciokeveréket 3,5 bar nyomású hidrogéngáz alatt hidrogénezzük, szobahőmérsékleten 2 órán keresztül. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk a reakciókeverékből, és a szürlctet bepároljuk. 72 mg habos anyagot kapva. Ezt éterben eldörzsöljük és megszárítjuk, 51 mg tisztított kívánt termékhez jutva (72%-os kinyerés). 1 H-NMR (CDCI3): 1,5 (s, 9H, BÖK). 8. példa Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-Phe)-His-sta-(amino-/2- -szek-butil-etilén/)-Phe ecetsavas sójának előállítását a következő reakciólépéseken keresztül végezzük. A) Az N-/t-butil-oxi-karbonil/-L-izoleucinal előállításánál 24,3 g (0,134 mmól) L-izoleucin-metilésztcrből, 13,5 g (0,134 mmól) trietil-aminból és 210 ml mctilén-kloridból álló reakciókeverékhez 29,1 g (0,134 mmól) di-terc-butil-dikarbonát (Aldrich) 25 ml meti^én-kloridban készült oldatát adjuk cseppen ként 0°C hőmérsékleten. A teljes hozzáadás után egy éjszakán keresztül hagyjuk a keverék hőmérsékletét szobahőrc emelkedni, majd szűrjük. A szürlctet az adott sorrendben 3x75 ml 0,1 N sósavval, 100 ml vízzel és 75 ml telített vizes NaHCOj oldattal mossuk, MgS04-tal szárítjuk és bcpároljuR 30,7 g N-(t-butil-oxi-karbonil/-L-izolcucin-metilésztert nyerve olaj formájában (93%-os termelés). H-NMR (CDClt,): í 0,92 (d, J = 7, 6H), 1,43 (s, 9H), 3.70 (s, 3H), 4,17 (dd, J = 5 és 9, 1H), 5,03 (d, J- 9, 1H). 15,0 g (61,1 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-L-izoleucin-metilészter olaj 260 ml száraz toluolban készült oldatát 78°C hőmérsékletűre hűtjük, és 153 ml 1 M diizobutil-alumínium-hidrid hexános oldatot adunk cseppenként hozzá olyan sebességgel, hogy az exoterm reakció ne melegítse a reakciókeveréket 65°C fölé. További 15 percig —78°C hőmérsékleten ke vertetünk, majd a hidrid felesleget 15 ml metanol óvatos hozzáadásával — ügyelve, hogy a hőmérséklet ne emelkedjen -65°C fölé — elbontjuk, és 200 ml kálium-nátrium-tartarát oldatot adunk a reakciókeverékhez. Szobahőmérsékletre való melegedés után a szerves fázist elválasztjuk és 3x200 ml éterrel extraháljuk. Amennyiben szükséges az alumíniumsók oldásához további kálium-nátrium-tartarát oldatot adunk a keverékhez. Az egyesített szerves extraktumokat nátrium-szulfáttal szárítjuk és bepároljuk. olajos nyersterméket kapva. A racemizálódás elkerülésére az olajat -78°C hőmérsékleten tároljuk, és további tisztítás nélkül használjuk fel a következő reakciólépésnél. 132 g nyersterméket kapunk (98%-os termelés). Rf = 0.32 (35%-os termelés) 'll NMR (CDCU): 5 1,00 (d, J = 7, 6H), 1,46 (s, 9H), 9.65 (s. 111). B) Az. (amino-/2-szek-butil-etílén/)-fenilalanin-benzilésztcr-dihidroklorid előállításához 2,00 g (9,29 mmól) N-/t-butiI-oxi-karbonil/-L-izleucinal és 3,78 g (8.84 mmól) L-fcnilalanin-benzilészter-p-tozilát (Chemalog) 150 ml metanolban készült oldatát 3 angströmös molekulaszite (Ventron) jelenlétében kevertetjük 35 percen keresztül szobahőmérsékleten. 0.73 g (11.6 mmól) NaCNBIU-et adunk hozzá, és a kevertetést egy órán keresztül folytatjuk szobahőmérsékleten. A molekulaszitát kiszűrjük, a szürletet olajos maradékig pároljuk, amit telített vizes NaHC03 oldattal hígítunk és kétszer éterrel extrahálunk. Az egyesített éteres extraktumot NajSO^-tal szárítjuk, és olajos maradékig pároljuk, amit gyorskromatografálással tisztítunk eluensként 12% etil-acetátot tartalmazó hexánt használva. 1,69 g (/t-butil-oxi-karbonil/-amino-/2-szek-butil-etilén/)-fenilalanin-benzilésztert nyerünk olaj formájában (40%-os kinyerés). Rp= 0.28 (25% etil-acetát hexánban). Az olajos anyag állás közben kristályosodik. Op.: 53-55°C. 1 H-NMR (CDCU): 5 0,6 1,0 (m, 6H), 1,48 (s, 9H), 2,92 (d, J = 7 , 2H), '5,07 (s, 2H), 7,17 (s, 5H), 7.25 (s, 5H). 2,94 g (6,47 mmól) (/t-butil-oxi-karbonil/-amino-/2-szek-butiI-etilén/)-fenilalanin-benzilésztert 110 ml 4 N sósavas dioxánban oldunk, és az oldatot 2 órán keresztül szobahőmérsékleten kevertetjük, a levegő nedvességétől CaCl2 csővel védve. Az oldószert csökkentett nyomáson étercs azeotróp formájában eltávolítjuk és a maradékot éterben eldörzsöive, 2,65 g fehér szilárd anyagot kapunk. A termék 95%-ában a védőcsoport eltávolított. Op.: 183- 184ÖC. .R^*0,73 (butanol/víz/ecetsav, 4 :1 : 1). 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10
