196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
2 1 .-N-im-/t-butil-oxi-karbonil/-hisztidin)-sztatin-izoleucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter védőcsoportjainak eltávolításával. 328 ing nyersterméket kapunk fehér szilárd anyag formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő lépésnél. 1 H-NMR (CD3OD): 55,2 (s, 2H, benzil CH2). G) Az (N-/t-bu(il-oxi-karbonil/-fenil-alanin)-hisztidin-sztatin-izolcucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter előállításához 20 ml °C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 329 mg (0,487 mmól), az F) lépésnél nyert hisztidin-sztatin-izoleucin-/amino-n-vaj-benzilésztcrt, 0,128 ml (1,17. mmól) N-metil-morfolint, 155 mg (0,585 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-L-fcnil-alanint, 79 mg' (0,585 mmól) N-hidroxi-bcnzotriazolt és 121 mg (0,585 mmól) diciklohexil-karbodiimídet. Az oldatot 19 órán keresztül kevertctjük 20°C hőmérsékleten. A reakcióelegyet a C) lépésnél leírtak szerint dolgozzuk fel és kromatográfiásan 324 mg tisztított terméket nyerve. 'h-NMR (CDCI3): 61.5 (s, 9H, BÖK). H) Az (N-ít-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidín-sztatin-izolcucin-(amino-/n-vajsav/) végtermék előállításához 5 ml metanolban oldott, 324 mg (0,38 mmól), a G) reakciólcpésnél kapott (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenfl-alanin)-hisztidin-sztatin-izolcucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilésztert hidrogénezünk szobahőmérsékleten, 3,5 bar nyomású hidragengáz alatt, 20%-os Pd(OH)2/C katalizátor jelenlétében. A rcakciókcvcrékből szűréssel eltávolítjuk a katalizátort, és a szürletet szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot éterben eldörzsölve, 190 mg tiszta kívánt végterméket kapunk fehér por formájában. 1 H-NMR (CDCI3): 61.5 (s,9H, BÖK). 4. példa Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-Phc)-His-Sta-(amino-(4-szek-bulil-vajsav/)- előállítását az alábbi reakciólépéseken keresztül hajtjuk végre. A) Az N-/t-butil-oxi-karbonil/-izoleucinnal előállításához 10,0 g (40,7 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil/-L-izoleucin-metilésztert oldunk 100 ml toluolban. Az oldatot —75°C hőmérsékletűre hűtjük, és 102 ml 1 N diizobutil-alumínium-hidrid toluolos oldatot adunk cscppenként hozzá úgy, hogy a reakciókeverék hőmérséklete -65°C alatt legyen. Miután valamennyi hidridet hozzáadtuk, a reakciókeveréket 10 percen keresztül kevertetjük -75°C hőmérsékleten, majd 10 ml metanol lassú hozzáadásával a hidridet elbontjuk, a hőmérsékletet —65°C alatt tartva. A rcakcióoldatot kálium-nátrium-tartarát hideg vizes telített oldatának 200 ml-éhez öntjük. A keverékre étert rétegezünk, és egy órán keresztül kevertetjük, majd a szerves fázist elválasztjuk, sóoldattal mossuk, vízmentes Na2SO^ felett szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. 7,0 g nyersterméket kapunk, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésbcn. 1 H-NMR (CDCI3): 5 1,5 (s, 9H, BÖK). B) Az ctil-L-(4-amino-4-szek-butil-vajsav)-hidroklorid előállításához 1 g (4,6 mmól), az A) lépésnél kapott N-|t-butil-oxi-karbonilí-izoleucinalt és 1,93 g (5,56 mmól) karbetoxi-metilén-trifenil-foszforánt feloldunk 50 ml kloroformban és az oldatot hagyjuk 48 órán keresztül állni 20°C hőmérsékleten. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, és szilikagélen kloroformmal kromatografálva tisztítjuk. 1 g tisztított etil-L-(4- -/t-butil-oxi-karbonil-amino/-4-szek-butil-delta-2- -butirát)-ot nyerünk olajos anyag formájában. ^-NMRÍCDC^)'- S4,2(s, 2H,etil CH2). 300 mg (1,05 mmól) etil-L-(4-/t-butil-oxi-karbonil-amino/-4-szek-butil-delta-2-butirát)-ot hidrogénezünk metanolban két órán keresztül 3,5 bar nyomású hidrogéngáz. alatt 20%-os Pd(OH)->/C katalizátor jelenlétében. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk a reakciókeverékből, és a szürletet forgó bepárlóban bepároljuk 300 mg nyers etil-L-(4-/t-butil-oxi-karbonil-amino/-4-szek-butil-butirátot kapva olaj formájában. 1 H-NMR (CDC13):6 4,2 (s, 2H, etil CH2). 300 mg ctil-L-(4-ft-butil-oxi-karbonil-amino/-4- -szek-butiI-butirát)-ot 4 ml 3,7 N sósavas dioxánban oldunk, és az oldatot szűréssel egy órán keresztül kevertetjük 20 C hőmérsékleten . A reakcióclegyet szárazra pároljuk, 231 mg habos nyersterméket nyerve, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CDCl3)í 4,2 (s, 2H, etil CH2). C) Az. (N-/t-butíl-oxi-karbonil/-sztatin)-(amino-/4-szekbutil-vajsav)-etilészter előállításához 15 ml °C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 286 mg (1,04 mmól) N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatint, 232 mg (1,04 mmól), a B) lépésnél nyert etil-L-/4-amino-4-szek-butíl-butirát/-hidrokloridot, 141 mg (1,04 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt 105 mg (1,04 mmól) N-mctil-morfolint és 215 mg (1,04 mmól) diciklohexil-karbodiimidct. Az oldatot 19 órán keresztül 20°C hőmérsékleten kevertetjük. A reakciókeveréket leszűrjük, és a szürletet szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot szilikagélen kromatografáljuk, kloroformjctil-acetát eleggyel eluálva, így 400 mg tisztított termékhez jutunk. 1 H-NMR (CDCI3): 5 1,5 (s, 9H, BÖK). D G) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil|-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-(amino-/4-szek-butil-vajsav/)-ctilésztert a 3. példa D G) lépésénél leírtak szerint állítjuk elő, 400 mg (0,94 mmól), a C) reakciólépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-(amino-/4-szek-butilvajsav/)-etilésztert a 3. példa D— G) lépésénél leírtak szerint állítjuk elő, 400 mg (0,94 mmól), a 0) reakciólépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-(amino-14-szek-butil-vajsav/)-etil-észtert 211 mg tisztított (N-/t-butil-oxi-karbonil/-feniIalanin)-hisztidin-sztatin-(amino-/4-szek-butil-vajsav/)-etilészterré alakítva. 1 H-NMR (CDCI3): 6 1,5 (s, 9H, BÖK). H) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-(amino-/4-szek-butil-vajsav/) kívánt végtermék előállításához 200 mg (0,274 mmól), a G) reakciólépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-(amino-/4-szek-butil-vajsav/)-etilész‘ tért 5 ml dimetoxi-etánban oldunk, és 0,3 ml 1 N vizes NaOH oldatot adunk hozzá. A reakciókeveréket 3 órán keresztül kevertetjük 20°C hőmérsékleten. Majd további, 0,3 ml 1 N vizes NaOH oldatot adunk hozzá, és a kevertetést egy órán keresztül folytatjuk 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
