196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 2. példa Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-Phe)-His-Sta-lle-Sta-iiátriuimót az alábbi rcakciólépéseken keresztül készítjük el: A) Az (N-/t-butiI-oxi-karboníI/-izoleucin)-sztatin-etilésztei előállításához 100 ml 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 717 mg (3 mmól) szlatin-etilészter-hidrokloridot, 304 mg (3 mmól) N-metil-morfolint, 865 mg (3,6 mmól) N-/t-butil-oxi-karbonil/-L-izoleucin 1/2 H20-t, 486 mg (3,6 mmól) N-hidroxi-beuzotriazolt és 1,91 g (80%-os tisztaságú, 3,6 mmól) 1 -ciklohexil-3-(2- -morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-ioluolszulfonátot. Az oldatot 19 órán keresztül kevertetjük 20°C hőmérsékleten. A reakcióelegyet ezután 75 ml 5,5%-os vizes sósavval, 75 ml telített vizes NallC03 oldattal és végül 75 ml sóoldattal mossuk, és vízmentes MgS04 felett szárítjuk. Szűrés és bepárlás után 1,39 g nyersterméket kapunk habos anyag formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakcióban. 1H-NMR (ODCI3): 5 1,5 (s, 911, BÖK). B G) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-izoleucin-sztatin-etilésztert az 1. példa B-G pontjaiban leírtak szerint állítjuk elő, 1,37 g az A) reakciólépésnél nyert (N-/t-butil-o.xi-karbonil/-izoleucin)-sztatin-etilészterből kiindulva. 128 mg kívánt terméket kapunk, hab formájában. 1H-NMR-(CDC13): 5 1,5 (s, 9H, BÜK). A G) lépés kromatográfiás tisztításával kloroform/ etanol 95 : 5 oldószerelegyet használunk. H) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-Phe)-His-Sta-Ile-Sta-nátriumsójának előállításához 120 mg (0,14 mmól), a G) lépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil)-fenilalanin)-hisztidin-sztatín-izoIeucin-sztatin-etilésztert oldunk 2 ml dimetoxi-etánban, és az oldathoz 0,17 ml 1 N vizes NaOII oldatot adunk, 2 és fél órás, 20°C hőmérsékleten történő kevertetést követően újabb 0,17 ml 1 N vizes NaOH oldatot adunk hozzá. További 2 órás keverés után a reakciókeverékből forgó bepárlóban eltávolítjuk a dimetoxi-etánt, 5 ml vízzel hígítunk, és a kémhatás pH=7,8-ra való beállítása után az oldatot fagyasztva szárítjuk. A kapott maradékot éterben szuszpendáljuk. A felülúszót szárazra párolva, 88 mg habos anyagot kapunk, amit kis térfogat éterben eldörzsölve 64 mg tisztított (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-izolcucin-sztatin-nátriumsói nyerünk sárgás por formájában. 1 H-NMR (CDCl^): 5 1,5 (s, 911, BÖK). 3. példa Az (N-/t-butil-oxi-karboniI/-Phe>His-Sta-Ile-(amino-/n-vajsav/) előállítását a következő reakciólépéseken keresztül valósítjuk meg. A) Az N-/t-buti!-oxi-karbonil/-izolcucin)-(amino-/n-vajsav/)-bcnzilcsz,tcr előállításához 60 ml 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 2,4 g (10 mmól) N-/t-butil-oxi-karhonil/-L-izoleucint, 1,0 g (10 mmól) N-metil-morfolint, 1,93 g (10 mmól) N-hidroxi-bcnzotriazolt és 4,23 g (80/-os tisztaságú, 10 mmól) l-eiklohexil-3-/2- -n»oifolino-etil/-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonálotrt és az oldatot 19 órán keresztül kevertetjük 20 ( hőmérsékleten. A reakcióelegyet szárazra pároljuk, és a bepárlási maradékot etil-acetátban oldjuk. Az oldatot kétszer 50 ml 5%-os vizes sósavval, kétszer 50 ml 1 N vizes NaOH oldattal, egyszer vízzel és egyszer sóoldattal mossuk, vízmentes-Mg-SO4 felett szárítjuk, szűrjük és forgó bepárlóban bepároljuk, 2,87 g nyerstermékei kapva hab formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CDCI3): 5 1,5 (s, 9H, BÖK). B) Az izoleudn-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter-hidroklorid előállításához 2,87 g (7,1 mmól) N-/t-butil-oxi-karbonil/-izoleucin)-(amino-|n-vajsav/)-benzilésztert, amit az A) reakciólépésnél nyertünk, feloldjuk 10 ml 3,7 N sósavas dioxánban, és az oldatot egy órán keresztül hagyjuk állni 20°C hőmérsékleten. Ezután az oldatot szárazra pároljuk, és a bepárlási maradék éteres eldörzsölése után 2,4 g nyersterméket kapunk fehér, szilárd anyag formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CD3OD) : 6 5,2 (s, 6H, benzil CH2) C) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-izoleucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter előállításához 20 ml 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 275,35 mg (1 mmól) N-/t-butil-oxi-karbonil/ sztatínt, 101 mg (1,0 mmól) N-metil-morfolint, 342 mg (1 mmól) a B( reakciólépésnél nyert izoleuein-(amino-/n-vajsav)-benzilészter-hidrokloridot, 135 mg (1,0 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt és 206 mg (1,0 mmól) diciklohcxil-karbodii^rtidet, és az oldatot 19 órán keresztül kevertetjük 20 C hőmérsékleten. Az oldatot szűrve és bepárolva, a kapott maradékot etil-acetátban szuszpendáljuk. A keveréket szűrjük, és a sziirletet szárazra pároljuk. A bepárlási maradékot szililagélen kromatografáljuk, kloroform/-etil-acetát eluenst használva. 464 mg tisztított terméket nyerünk. 1 H-NMR (CDC13) 5 1.5 (s, 911, BÖK). D) A sztatin-izoeucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter-hidrokloridot a B) reakciólépésnél leírtakhoz hason-' lóan nyerjük. 464 mg (0,82 mmól), a C) lépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-izoleucin-(amino-/n-vajsav/)-benziIészter védőcsoportjának eltávolításával. 416 mg nyersterméket kapunk fehér szilárd anyag formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő lépésnél. 1 H-NMR (CDCI3): §5,2 (s, 2H, benzil CH2): E) Az. (N-Oí-/t-butil-oxi-karbonil/-N-ini-/t-butil-oxi-karbonil/-hisz tidin )-sz. tatin-izoleucin-(amino-/n-vajsav/)- -benzilés/.ter előállítását a C) reakciónál leírtakhoz hasonlóan végezzük, 416 mg (0,83 mmól), a D. reakciólépésnél kapott szta!in-izolcucin-(amino-/n-vajsav/)-benzilészter-hidrokloridot 295 mg (0,82 mmól) N-a-/t-butil-oxi-karbonil/-N-im-/t-huti]-oxi-karbonil/-L-hisz ti dinnel összekapcsolva. 391 mg tisztított terméket kapunk. 'H-NMR (CDCU):S 1,5 (s, 9H, BÖK) és 1,6 (s, 9H, BÖK). F) A hisztidin-sztatin-izoleucin-(umino-/n-vajsav/)-benzilészter-dihidrokloridot a B) reakciónál leírtak szerint állítjuk elő, 391 mg (0,49 mmól), az F) reakciólépésnél kapott (N-«.|-/t butil-oxi karhonil/-5 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
