196833. lajstromszámú szabadalom • Eljárás sztatint vagy származékait tartalmazó peptid származékok előállítására
1 2 -Phe peptidszármazékot az alábbi reakciólépéseken keresztül állítjuk elő: A) Az (N-a-/t-butil-oxi-karbonil/-N-epszilon-ben,zil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzilészter előállításához 50 ml 0 C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 162 mg (1,2 ni mól) N-metil-morfolint, 428 mg (1 mmól) L-fenilalanin-benzilészter-p-toluolszulfonátot, 456 mg (1,2 mmól) N-a-(t-butil-oxi-karbonil)-N-epsziIon-benzil-oxi-karbonil-L-lizint és 635 mg (80%-os tisztaságú, 1,2 mmól) 1 -ciklohexil)-3-/2-morfolino-etil/-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonátot. A kapott oldatot 19 órán keresztül 20°C hőmérsékleten kevertetjük. A reakcióelegyet ezután egymást követően 75 ml 5,5%-os vizes sósavval, 75 ml telített, vizes NaHC03 oldattal és 75 ml sóoldattal mossuk, majd vízmentes MgS04 felett szárítjuk. Szűrés és bepárlás után 669 mg nyresterméket kapunk hab formájában. 1H-NMR (CDCl.,): 5 1,5 (s 911, BÖK). Ezt az anyagot további tisztítás nélkül közvetlenül felhasználjuk a kövletkező reakciólépésnél. B) Az (N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenil-alanin-benzilészter-hidroklorid előállításához az előző lépésnél nyert (N-a-/t-butil-oxi-karbonil/-N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin/-fenibIanin-benzilészterből 650 mg-t (1 mmól) feloldunk 7 ml 3,7 N sósava^ dioxánban, és egy órán keresztül hagyjuk állni 20 C hőmérsékleten. Az oldatot bepárol' juk, 583 mg nyers terméket kapva olaj'formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CD3OD): 5 5,2 (s, 2H, benzil CH2). C) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-/N-cpszilon-bcnzil-oxi-karbonil-lizin/-fenilalanin-benzilészter előállításához 50 ml 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 583 mg (1 mmól), a B) lépésnél nyert (N-epszilon-bcnzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzilészter-hidrokloridot, 330 mg (1,2 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-sztatint, 162 mg (1,2 mmól) N-hidroxi-benzotriazolt és 635 mg (80%-os tisztaságú, 1,2 mmól) 1-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluol-szulfcjjiátot. Az oldatot 19 órán keresztül kevertetjük 20 C hőmérsékleten. A reakcióelegyet az A) reakciólépésnél leírtak szerint dolgozzuk fel, 760 mg nyersterméket kapva, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő lépésnél. 1 H-NMR (CDCI3): 8 1,5 (s, 9H, BÖK). D) A sztatin-(N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzilészter-hidroklorid előállításához 10 ml 3,7 N sósavas dioxánban feloldunk 760 mg (1 mmól), a C) lépésnél nyert (N-/t-butil-oxi-karbonil/-sztatin)-(N-epszilon-bcnzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzil-észtcrt, és egy órán keresztül hagyjuk állni 20°C hőmérsékleten. A reakcióelegyet a B) lépésben leírtak szerint feldolgozzuk, 620 mg nyersterméket nyerve hab formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CD3OD): 85,2 (s, 2H, benzil CHA E) Az (N-ct/t-butil-oxi-karbonil/-N-im-/t-outil-oxi-karbonil/-hisztidin)-sztatin-/N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizinf-fenilalanin-benZiiészter előállításához 50 ml 0DC hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 600 mg (0,857 mmól), a D) reakciólépésnél nyert sztatin-(N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenü-alanin-benzilészter-hidrokloridot, 86,7 mg (0,957 mmól) N-metil-morfolint, 365 mg (1,03 mmól) N-o-(t-butil-oxi-k'arbonil)-N-im-(t-butil-oxi-karbonil)-L hisztidint, 135 mg (1,03 mmól) N-hidroxi-benzo-triazolt és 545 mg (1,03 mmól) l-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodíimid-meto-p-toluolszulfonátot, és 19 órán keresztül kevertetjük 20°C hőmérsékleten. A reakcióelegyet az A) reakciólépésnél leírtak szerint feldolgozzuk, hab formájában 770 mg nyersterméket nyerve, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakciólépésnél. 1 H-NMR (CDCU)' 8 1,5 (s, 2H, BÖK), 1,6 (s, 9H, BÖK). F) A hisztidin-sztatin-(N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzilészter-dihidroklorid előállításához 770 mg (0,95 mmól) az E) reakciólépésben előállított (N-Oí-/t-butil-oxi-karbonil/-N-im-/t-butil-oxi-karbonil/-hisztidin)-sztatin-/N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin/-fenilalanin-benzilésztert feloldunk 10 ml 3,7 N sósavas dioxánban, és 1,5 órán keresztül hagyjuk állni, 20 C hőmérsékleten. A reakciöelcgyet a B) reakciólépésnél leírtak szerint feldolgozva, 602 mg nyersterméket nyerünk hab formájában, amit további tisztítás nélkül használunk fel a következő reakcióban. *H-NMR (CD3OD): 55,2 (s, 2H, benzil CH2). G) Az (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-/N-epszilon-benziI-oxi-karbonil-iizin/-fenil-alanin-bcnzilészter előállításához 50 ml 0°C hőmérsékletű metilén-kloridban az adott sorrendben feloldunk 602 mg (0,689 mmól), az F) lépésnél nyert hisztidin-sztatin-N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-bcnzil-észter-dihidrokloridot, 139 mg (1,38 mmól) N-metil-morfolint, 219 mg (0,827 mmól) N-(t-butil-oxi-karbonil)-L-fenil-alanint, 112 mg (0,827 mmól) N-hidroxi-benzotiazolt és 438 mg (0,827 mmól) l-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimid-meto-p-toluolszulfonátot. Az oldatot 19 órán keresztül kevertetjük 20°C hőmérsékleten.-, A reakcióelegyet az A) reakciólépésnél leírtak szerint feldolgozva, 555 mg habos anyagot kapunk, kromatografálással tovább tisztítunk. Szilikagélen CH2Cl2/MeOH, 95 : 5 eluenssel kromatografálva, 136 mg tisztított terméket nyerünk hab alakjában. 1 H-NMR (CDCI3) 5 1,5 (s, 9H, BÖK). H) A kívánt (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-lizin-fenilalanin végtermékhez úgy jutunk, hogy 136 mg (0,17 mmól) (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-/N-epszilon-benzil-oxi-karbonil-lizin)-fenilalanin-benzilésztert és 70 mg 20%-os Pd(OH2)/C katalizátort adunk az adott sorrendben 15 mi metanolhoz, és a kapott keveréket 4 órán keresztül hidrogénezzük 3,5 bar nyomású hidrogén alatt, 20°C hőmérsékleten. A reakciókeveréket ezután Super-Celen leszűrjük, és a szürletet szárazra pároljuk. 76 mg üveges anyagot kapva, amit éterben eldörzsölve, 63 mg tisztított (N-/t-butil-oxi-karbonil/-fenilalanin)-hisztidin-sztatin-lizin-fenil-alanint nyerünk por formájában. 1 H-NMR (CD3OD): 5 1,5 (s, 9H, BÖK). 196 833 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
