196626. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 6720 jelzésű antibiotikum és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

5

196 626

6

juk a 6270 antibiotikumot. A tiszta 6270 antibiotikumot a nyers kristályból úgy különítjük el, hogy pl. kromatografáljuk a nyers kristályt. Az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk, a maradékot alkalmas oldószerben, pl. etil-acetátban feloldjuk, majd hígított sósavval kezeljük. Az oldatfázist bcpároljuk, s ennek folytán a 6270 antibiotikum szabad savként kristályosodik.

Ha a terméket nátriumsóként kívánjuk kinyerni, a fent említett — híg sósavas oldattal kezelt - oladfázist híg nátrium-karbonát oldattal kezeljük, majd az oldatfázist bepároljuk; így kapjuk a 6270 antibiotikum nátriumsóját. Az így - szabad savas alakban vagy nátriumsó alakjában - kapott 6270 antibiotikumot ezután alkalmas oldószerből, pl. n-hexán és etilacetát elegyéből átkristályosíthatjuk, így tiszta kristályokat kapunk. A szabad savas alakban kapott 6270 antibiotikum tulajdonságai az alábbiak;

(1) Színtelen tű alakú kristály; savas anyag.

(2) Olvadáspont: 115- 118 °C.

(3) Elemzési eredmény (talált) - C: 62,72 %; H: 9,49%; 0:27,78%.

(4) Fajlagos forgatóképesség: [«]|> : —11,5° (C = 1,0; metanol).

(5) UV-spektrum (melanolos oldatban felvéve): 210 nm-en vagy afelett nem figyeltünk meg maximum sávot.

(6) IR-spektrum (kálium-bromid pasztillával felvéve): 3470, 2980, 2945, 2890, 1735, 1460, 1380, 1315, 1165, 1102, 1075,987, 980 cm'1. A spektrumot az 1. ábra mutatja.

(7) Oldhatóság: Oldható metanolban, etanolban, etil-acetátban, kloroformban, éterben, acetonban és benzolban; nem oldható vízben.

(8) Színreakciók: Pozitív a vanillin-kénsavas reakció és a Dragendorff reakció; negatív a ninhidrin reakció; a l2 gáz színezi.

(9) Vékonyrélegkromátográfia (Kicsclgel GF2S4, Merck Co.):

Oldatrendszer

Rf érték

Kloroform: metanol (20:1)

0,49

n-hexán: etil-acetát (1:1)

0,08

Benzol: etil-acetát (1:1)

0,04

Benzol:accton (1:1)

0,53

Kloroform: accton (2: 1)

0,36

n-hexán: etil-acetát (1: 3)

0,13

Etil-acetát

0,22

(10) ‘H-NMR-spektrum: Három metoxiesoport jelenlétét figyeltük meg 5 ppm 3,39 (311), 3,49 (611) értékeknél, 100 MHz-en CDC.!3 és - belső standardként - TMS alkalmazásával. A spektrumot a 2. ábra mutatja.

(11) 13C-NMR-spektrum: a 3. ábra a 25 MHz-en, CDCI3 és TMS alkalmazásával végzett mérés eredményét mutatja; a szénatomok eredő száma eszerint: 44.

(12) Az I. táblázat mutatja az antibakteriális hatás spektrumát.

Megyjegyzések a táblázathoz: a: nutrient agar tenyészközeg; b: glicerin-nutrient agar tenyészközeg; c: burgonya-szacharóz agar tenyészközeg.

1. táblázat

Tesztorganizmus

Legkisebb gátló konc. [fig/ml]

Tenyész

közeg

Bacillus ccreus IAM-1 729

1,56

a

Bacillus circulans 1FO 3329

1,56

a

Bacillus subtilis PCI 219

6,25

a

Micrococcus flavus IFO 3242

1,56

a

Sarcina lutea N1HJ

3,13

a

Staphylococcus aureus

FDA209P JC-1

6,25

a

Staphylococcus aureus (rezisztens Penicillinre, Strcptomycinre, klóramfenikolra, tetraciklinre és

Kanamycinre)

6,25

a

Escherichia coli NIII.I JC-2

>

100

a

Escherichia coli (rezisztens Streptomycinre, Kanamy-cinre, klóramfenilkolra és tetraciklinre)

>

100

a

Klebsiella pneumoniae

PCI 602

>

100

a

Proteus vulgaris OX-19

>

ioo

a

Pseudomonas aeruginosa

IFO-3756

>

100

a

Mycobacterium smegmatis

ATCC607

1,56

b

Mycobacterium avium

IFO3153

1,56

b

Mycobacterium phlci NI1IJ

3,13

b

Penicillium chrysogenum

Q-176

>

100

c

Aspergillus flavus ATCC

9643

>

100

c

Cochliobolus miyabeanus

12,5

c

Alternaria mari

50

c

Candida albicans YU 1200

>

100

c

Saccharomyces cerevisiae sp.

77 törzs

>

100

c

A fent megadott fiziko-kémiai és biológiai jellemzők igazolják, hogy a találmány szerint előállított anyag egy poliéterek elnevezésű általános antibiotikum osztályba tartozik.

Az 1 H-NMR-spektrum alapján feltételezzük, hogy az anyag molekuláljában van három metoxiesoport. Egy molekulában három metoxicsoporttal rendelkeznek az ismert antibiotikumok közül pl. a következők (a zárójelben megadott szabadalmi ügyszámok megfelelő — elővizsgálat nélkül közzétett — japán szabadalmi bejelentés [JSzBj ügyszámai):

C20-I2 (JSzB 53919-1983); A-204B (Handbook of Microbiology 410, vol 3, CRC Press); T-42082 (JSzB 79730-1976); T-40517 (JSzB 10581-1975); 38295 (JSzB 125793-1976); 6016 (JSzB 84576- 1979); X-14868C (JSzB 120696-1981); CP47433 (JSzB 154108-1982); 47434 (JSzB 154187-1982); és LL-C23O240 (JSzB 78598-1983).

5

10

15

20

2F>

30

35

40

45

50

55

60

65

4