196626. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 6720 jelzésű antibiotikum és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 196 626 8 Ezektől az ismert anyagoktól viszont az új 6270 antibiotikum olyan jellemzőkben különbözik, amilyen pl. az olvadáspont, a fajlagos forgatóképcsség, az elemzésben kapott komponens értékek, illetve az IR-spektrum, és nyilvánvaló, hogy új antibiotikumról van szó. Különösen nagy a 6270 antibiotikum baktériumellenes hatása Gram-pozitiv baktériumokkal szemben; az anyag baktériumellenes hatóanyagként alkalmazható. Továbbá kis koncentrációban alkalmazva kifejt kokcidiózisellcncs, alkaölő és vírusölő hatást, és jól alkalmazható kokcidiózisellenes szerként szárnyasok, pl. csirke, fogoly, kacsa, liba és pulyka, valamint egyéb háziállatok, pl. marha, sertés, nyúl, bivaly, kecske vagy birka kezelésére; háziállatok kezelhetők c szerrel hasmenés ellen; végül a 6270 antibiotikum alkalmazható olyan szerként, amely növeli háziállatok, köztük a szárnyasok táplálékának hatékonyságát, illetve gyorsítja növekedésüket. A találmányt a továbbiakban példák keretében magyarázzuk részletesebben, amelyekre a találmány azonban nem korlátozódik. (A mennyiségi arányokat tömeg%-ban adjuk.) I. példa Tenyészközeget készítünk, amely tartalmaz 6,0 % glükózt, 2,0 % szójabablisztct, 1,0 % Toruía élesztőt és 0,5 % kálcium-karbonátot, s melynek pH-ja 6,0. 1 liter tenyészközeget inokulálunk hjocardiopsis sp. 6270 törzzsel (FERM BP-717) és 30 °C hőmérsékleten 48 órán át tenyésztjük. Az így kapott táptalajjal inokulálunk 100 liter egyező összetételű tenyészközeget és a tenyésztést 30 °C hőmérsékleten 96 órán át folytatjuk keverés és Icvegöárampltatás közben 200 liter befogadóképességű tankban. A levegőztetést 100 liter/perc intenzitással végezzük, a keverő fordulatszáma 250 ford/perc. Radiolite 700 védjegyű szűrőadalékot adunk a táptalajhoz, amelyet ezután szűrünk a sejtek elkülönítése céljából. A sziirlctet 40 liter ctilacetáttal extraháljuk, a sejteket 30 liter acetonnái, amely utóbbi extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk az aceton eltávolítása céljából, majd 20 liter etil-acetáttal extraháljuk. Ezt az extraktumot egyesítjük a szürlet extraktumával és a kapott elegyet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot kloroformmal töltött 750 g-nyi szilikagél oszlopon (kereskedelmi neve: WAKO gel C-200) adszorbeáljuk, az oszlopon átbocsátunk kloroform: metanol 100:1 arányú elegyét. Az aktív frakciót csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, így olajos maradékot kapunk, amelyet kis mennyiség acetonban feloldunk, majd az oldatot acctonnái töltött Sephadcx LII-20 oszlopon adszorbeáljuk és acetonnal cluáljuk. Az így kapott aktív frakciót bepároljuk, s így nyers kristályokként kapunk 6270 jelzésű antibiotikumot. A kristályokat etil-acetátban feloldjuk és hígított sósavval kirázzuk. Az etil acetátos fázist csökkentett nyomáson bepároljuk. A képződő kristályokat n-hexán és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk, így szabad savas alakban kapunk 23,4 g színtelen, tű alakú, kristályos 6270 jelzésű antibiotikumot. A szabad sav alakjában így kapott 6270 jelzésű antibiotikumnál kimutathatók a fentiekben megadott fiziko-kémiai és biológiai tulajdonságok. 2. példa Az 1. példa szerint szabad sav alakjában előállított 6270 jelzésű antibiotikumból 5 g-ot feloldunk etilacetátban és hígított nátrium-karbonáttal kirázzuk. Az etil-acctnlos fázist csökkentett nyomáson bepároljuk, a képződő kristályokat n-hexán és etil-acetát elegyéből átkristályosítjuk; így a 6270 jelzésű antibiotikum nátriumsójából 4,51 g-ot nyerünk színtelen hasáb alakú kristályokként, amelyek olvadáspontja 232 és 235 "c: közötti. A fent leírt módszerrel állíthatjuk elő a 6270 jelzésű antibiotikum káliumsóját, ha a hígított nátriumkarbonáttal rázzuk ki a szabad alakú 6270 jelzésű antibiotikum etil-acetátos oldalát. Az így kapott káliumsó is színtelen hasábos kristály alakú, növekvő hőmérsékleten 264 °C-tól kezdve fokozatosan színeződik. bomlási hőfoka 285- 288 °C. Ugyancsak a fent leírt módon állíthatjuk elő a 6270 jelzésű antibiotikum ammaóniumsóját, a hígított nátrium-karbonát helyett vízzel hígított ammóniát alkalmazva. Az így kapott ammóniurnsó színtelen, tűszerű kristályos alakú, olvadáspontja 139 és 141 °C közötti. A 6270 jelzésű antibiotikum báriumsóját ugyancsak a fent leírt módon állíthatjuk elő, a hígított nátrium-karbonát helyett bárium-hidroxidot alkalmazva. Az így kapott só fehér kristályos por alakú, olvadáspontja 139 és 142 °C közötti. 1. teszt példa: Kokcidiózisellenes hatékonyság A tcsztmintaként alkalmazott hatóanyag és táplálék: A 6270 jelzésű antibiotikumot egyenletesen elkeverjük az Oriental Yeast Co. által gyártott kombinált csirkeeledellel és előírt koncentrációt állítunk be. Az így kapott táplálékot a csibék szabadon fogyaszthatják azon időtartamban, amely két nappal az oociszta inokulációja előtt kezdődik és a fertőzést követő nyolcadik napig tart. Összehasonlító szerként Monensint alkalmazunk, amely ismert kokcidiózisellenes szer. A tesztben alkalmazott csibék Töjásrakó Shever Starcross fajtabéli egészséges kakasokat alkalmazunk, amelyek nevelése a kokcidiózis fertőzést megbízhatóan kizáró körülmények között történt, és amelyek a teszt kezdetekor 7 naposak (a fertőzés napján tehát 9 naposak). Teszt csoportonként öt csibét alkalmazunk. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
