196626. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 6720 jelzésű antibiotikum és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
3 196 626 4 (1) Szncharóz-nitrátos tenyészközeg (DiTco — Czapeck-fé!e oldat agar) (a) jó, közel szűkre (2ba) (b) fehér, porszerű (c) nincs (2) Glükóz-aszparagin tenyészközeg (a) jó, világos borostyán színtől (3ic) nyersgyapjú színig (3gc) (b) közel szürke (3ba) (c) nincs (3) Glicerin-aszparagin tenyészközeg (a) ncmjó, 2ba (b) enyhén alakos (c) ' nincs (4) Keményítő agar tenyészközeg (a) kiváló, 3ic-től gyöngyház rózsáig (3ca) (b) fehér, porszerű (c) nincs (d) keményítő hidrolízise: negatív (5) Tirozin agai tenyészközeg (a) nem jó, 3ge (b) nincs (c) nincs (6) Nutrient agar tápközeg (Difco — Bacto Nutrient agar) (a) nem jó, világos búzaszín (2ea) (b) nincs (c) nincs (7) Élesztő-maláta extraktum agar tenyészközeg (a) kiváló, repedések, topáz (3ne) (b) fehér (c) nincs (8) Zabliszt agar tenyészközeg (a) jó, gyöngyház (2ca) (b) 2ba (c) nincs III. Fiziológiai jellemzők (1) Keményítő ferdeagar tenyészközegen, hőmérséklet gradiens inkubátort alkalmazva, a növekedési hőmérséklet tartomány: 6,5-38 °C (nem figyelhető meg növekedés 5 °C alatt, illetve 39,5 °C felett). Optimális hőmérséklet: 27—38 °C. (2) Glükóz-pepton-zselatin szúróminta elfolyósítása: pozitív. (3) Keményítő hidrolízise: negatív. (4) Fölözött tej koaguláció és peptonizáció:nincs koaguláció, számottevő peptonizáció (37 °C). (5) Melanin képződés: ISP-tirozin agar tenyészközeg: negatív. ISP-tripton-élesztő extraktum táptalaj: negatív ISP-pepton-élesztő-vas agar tepyészközeg: negatív (6) NaCI tűrőképesség: 4 %, vagy annál nagyobb koncentráció esetén nincs növekedés. (7) Xantin, hipoxantin, adenin oldhatóság: negatív. IV. Szénforrás hasznosítás (Pridham és Gottlieb bázis közeg) Pozitív: D-glükóz, L-arabinóz, D-xilóz, szalicin. Gyengén pozitív: D-fruktóz, szacharóz. Negatív: Inosit, L-ramnóz, raffmóz, D-mannit. A 6270 törzset az. Aclinoinyeclalcs rend Nocardiopsis Meyer 1976-hoz tartozó törzsként azonosítjuk, mert a fent megadott különböző jellemzők szerint az légmicéliumon hosszú spóraláncot képez, a teljes sejt hidrolizátum mezo-diamino-pimelinsavat és galaktózt tartalmaz, de nem tartalmaz arabinózt és mndurózt és nem mutattunk ki mikolsavat sem. A találmány szerinti eljárás során alkalmazhatjuk a 6270 antibiotikumot termelő mikroorganizmus tenyésztésére azokat az ismert módszereket, amelyek az Actinomycetales rendbe tartozó ismert törzsek tenyésztésénél is alkalmazást nyernek; ipari méretű előállítás eseten előnyösen olyan tenyésztési módszert alkalmazunk, amely magában foglalja a levegőztetést és a rázást. Az előállításhoz tenyészközegként is az Actinomycetales rendjébe tartozó törzsek tenyésztése során általában szokásos közegeket alkalmazhatjuk, nevezetesen különböző sz.énforrások, nitrogenforrások, szerves vagy szervetlen sók és szükség szerint habzásgátló szerek alkalmazhatók megfelelő kombinációban. Szénforrásként alkalmazható egyebek között glükóz, keményítő, glicerin, dextrin, szacharóz, állati vagy növényi olaj. Nitrogén forrásként alkalmazható pl. szójababliszt, kukorica áztatólé, búzacsíra, ammónia. Szükség szerint alkalmazhatók továbbá szervetlen sók, pl. kalcium-karbonát, nátrium-klorid, kálium-klorid, továbbá hozzáadhatok foszfátok. Olyan szerves vagy szervetlen só is hozzáadható, amely elősegíti a mikroorganizmus növekedését és igy megkönnyíti a 6270 antibiotikum termelését. A tenyésztési hőmérséklet általában 25 és 35 °C közötti, előnyösen 30 °C körüli. A tenyésztés időtartama a különböző feltételektől függően változó, a termelt antibiotikum felhalmozódása általában a 72 és 148 óra közötti időtartamban éri el maximumát. A 6270 antibiotikumnak a tenyészközegből való elkülönítésénél és tisztításánál annak fiziko-kémiai tulajdonságait hasznosítjuk és ennek során hagyományos módszereket alkalmazhatunk, pl. hasznosítva a szennyezésekhez képest eltérő mértékű oldhatóságát, az ioncserélő gyantához vagy más adszorbenshez képest eltérő mértékű adszorpcióját, alkalmazhatunk vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel végzett extrahálást vagy különböző eszközök alkalmas kombinációját, pl. kicsapatás, szennyezés eltávolítás, dialízis, szárítás, átkristályosítás. A tenyészközegben előállított 6270 antibiotikum pl. előnyösen a következőképpen nyerhető ki. Szűrőadalékot adunk hozzá, amely lehet pl. diatómaföld vagy Radiolite 700, majd a tápközeget szűrjük, s egyfelől a szürletet, másfelől a mikroorganizmus sejteket cxtraháljuk alkalmas oldószerrel, pl. ctil-ncctáttnl vagy acetonnal. íizután egyesítjük a sejtextraktumot és a szűrletextraktumot. Az oldószert az extraktumról ledesztilláljuk, és így nyers kristály alakjában kap5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
