196462. lajstromszámú szabadalom • Eljárás imun interferon előállítására

20

196462

21

ezért a 15K fehérje C-terminális CNBr peptidjének tekintendő. A fenti fehérje aminosav-analízis alapján (8. táblázat) az IFN-u 121-131 sz. arainosav-maradékának felel meg (arginin nem mutatható ki). A 11 aminosav szekvenciáját szekvencia-analízissel igazoljuk (2. ábra). A 18K rlFN-? esetében az eluálás korai részében viszonylag széles csúcsot kapunk, amelyet sekély gradienssel két csúcsra választunk szét. Az aminosav analízis azt mutatja, hogy az első csúcs a 18K fehérje CNBr C-terminális peptidje (8. táblázat) és az

aminosav-összetétel a 138-146. aminosavmaradéknak felel meg. A 9 aminosav szekvenciáját szekvencia-meghatározással igazoljuk (2. áb-ra). A 15K fehérje C- 5 terminális aminosava a meghatározás alapján lizin.

A fenti eredmények igazolják, hogy a 18K species az érintetlen rlFN-'x molekula, mig a 15K species a proteolitikus termék. A 10 131 sz. aminosav és a 132 sz. aminosav maradéka között peptid kötést (Lys-Arg) a 15K speciesen hasítjuk el.

6. táblázat rIFN-% tisztítása

Tisztítási

Ossz-Teljes

Fajlagos

Tisz-Kilépés

fehérje

aktivitás

aktivitás

titás

termelés

mg

egység

egység/ml-szoros%

I. Guanidines

extrakció

Felülúszó

2.806

2.5 x 108

9 x 104-100

Kovasav

98

1.0 x 10s

1 x 106

ii

40

Monoklonális

anti-test

8

0.8 x 108

1 x 107

110

32

11. Szonifikáció

Felülúszó

6.136

8.0 x 107

1.3 x 104-100

Kovasav

87

4.5 x 107

5.2 x 10c

400

56

Monoklonális

anti-test

2

2.0 x 107

1.0 x 107

769

25

7. táblázat

A 15K és 18K rlFN-ü aminosav-összetétele (maradék számok)

18K (1-146)

15K (1-131)

Asp

20.9 (20)

19.9 (20)

Thr

5.1 (5)

4.9 (5)

Ser

9.8 (11)

6.7 (9)

Glu

18.5 (18)

15.1 (16)

Pro

* (2)

* (2)

Gly

5.9 (5)

5.6 (4)

Alá

8.2 (8)

7.3 (7)

Cys

* (2)

* (2)

Val

9.1 (8)

9.1 (8)

Met

4.8 (4)

3.8 (3)

Ile

7.2 (7)

6.6 (7)

Leu

10.5 (101

9.6 (9)

Tyr

5.5 (5)

4.8 (5)

Phe

10.3 (10)

8.2 (9)

His

1.8 (2)

2.5 (2)

Lys

19.9 (20)

16.9 (19)

Arg

8.6 (8)

5.6 (3)

Trp

* (1)

* (1)

A zárójelben levő számok a DNS szekvencia alapján várható maradékok számát jelzik. * az értékeket nem határoztuk meg.

12