196425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás primicin komponenseinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 196425 6 mely alkalmas fémsóval impregnált szilikagéllel töltött oszlopot. Azt találtuk, hogy az elválasztás hatékonyságát nagy mértékben növeli a saját töltésű szilikagél oszlophoz képest a készoszlop használata, vagy ennek hiányéban a fémsóval impregnált géllel töltött oszlop alkalmazása. A gyárilag készre töltött oszlopnál alkalmazott enyhe túlnyomás (111,4-506,6 KPa) előnyösen használható az impregnált géllel töltött oszlop esetében is. Az impregnálás sorén a gélt megfelelő fémsóval keverjük össze, előnyösen a fémsó szerves oldószerrel készült oldatában szuszpendáljuk, kívánt esetben az oldószert eltávolítjuk, és az impregnált gélt oszloptöltetként használjuk. Az oszlopot szerves oldószerben, előnyösen halogénezett alifás szénhidrogénben (pl. kloroform) szuszpendált impregnált géllel töltjük meg, és kis túlnyomással (111,4-253,3 KPa) tömöritjük. Ha fémsóként ezüst-sót alkalmazunk, az ezüst-só redukálódásának megakadályozására kívánatos az oszlopot a fénytől megvédeni, pl. alufóliás takarással. Az elválasztandó anyagkeveréket az eluensként is használt oldószerelegyben oldva visszük fel a gélágy tetejére, s kívánt esetben enyhe túlnyomással adszorbeáltatjuk. Az oszlopra felvitt szétválasztandó anyagkeverék lehet iparilag előállított primicin-szulfét, vagy abból a T/40808 számon közzétett magyar szabadalmi leírás szerint előállított szulfáttól eltérő primicin-só, előnyösen primicin-acetát, vagy primicin-monoklóracetát. Az elúciót bármelyik fentebb ismertetett oldószerrendszerrel elvégezhetjük. A legjobb elválasztást Lobar-tipusú oszlop alkalmazása esetén a szilikagél készréteg lapokra, míg a fémsóval impregnált géllel töltött oszlop esetében az impregnált szilikagél lapokra kidolgozott oldószerrendszerrel érhetjük el. Állandó áramlási sebességet tartva azonos mennyiségű frakciókat gyűjtünk, melyek anyagtartalmát VRK-s futtatással ellenőrizzük. Az azonos Rf-értékű anyagot tartalmazó frakciókat egyesítjük, és oldószeres kicsapással kinyerjük az egyes komponenseket. Az oszlopkromatográfiás elválasztás eredményeképpen a következő primicin komponenseket izoláltuk: eluensként kloroform : metanol : hangyasav : víz : formaldehid : n-butanol = 130 : 53 : 6 : 9 : 3 : 3 térfogatarányú elegyet alkalmazva: Ai = chinopricin (Rf = 0,29) A2 = midopricin (Rf = 0,31) Aa = metipricin (Rf = 0,33) Ci = oxipricin (Rf = 0,35) C2 = oximipricin (Rf = 0,37) Ca = oximetipricin (Rf = 0,39) Bi = hidropricin (Rf = 0,54) B2 = himipricin (Rt = 0,56) B3 = himetipricin (Rf = 0,58) A kinyert komponenseket megvizsgáltuk, és a következő eredményeket kaptuk: 1. ) Ai - chinopricin (Re = 0,29) A gyors atombombázásos tömegspektrometriai méréssel (.Fast atom bombardment mass spectrometry' rövidítve: FAB-MS) (2. ábra) mért molekulatömege: 1078. Az izolált Ai komponenst VRK és FAB-MS módszerrel kémiailag egységesnek találtunk. Ennek alapján, valamint az infravörös és a 1H, illetve 13C NMR egy- és kétdimenziós spektrumok alapján megállapított szerkezetét az I. általános képlet mutatja, (3. ábra) ahol Rí = butil-csoportot jelent. 2. ) Az - midopricin (Rí = 0,31) és A3 = metipricin (Rí = 0,33) FAB-MS módszerrel meghatározott molekulatömegük: 1092, illetve 1106 a felirt sorrendben. Ennek felhasználásával, valamint kémiai és 1H, illetve 13C NMR egy- és kétdimenziós spektroszkópiai módszerrel elvégzett szerkezetfelderitéssel megállapítottuk, hogy az Az és az A3 komponens az Ai komponens homológjai, az A2 egy CH2-csoporttal, az A3 két CHz-csoporttal hosszabb oldalláncot tartalmaz, tehát az I. általános képletben Rí = = pentil-, illetve hexil-csoportot jelent. 3. ) Ci - oxipricin (Rí = 0,35) Molekulatömege FAB-MS módszerrel mérve 946. A fenti szerkezetfelderítési módszerek segítségével meghatározott szerkezetét a II. általános képlet mutatja. (3. ábra), ahol Rí = butil-csoport. A II. általános képlet szerint a Ci komponens abban különbözik az Ai komponenstől, hogy a cukorrész helyett hidroxil-csoport kapcsolódik a 18-as szénatomhoz. 4. ) Cz = oximipricin (Re - 0,37) és Cz - oximetilpricin (Rí = 0,39) FAB-MS módszerrel mért molekulatömegük: 960, illetve 974 a felírt sorrendben. A fenti szerkezetfelderítési módszerek segítségével megállapítottuk, hogy a Ci komponens homológjai, a Cz egy CH2 -csoporttal, a C3 két CH2 -csopoi'ttal hosszabb oldalláncot tartalmaz, tehát a II. általános képletben Ri = pentil-, illetve hexil-csoportot jelent. 5. ) Bi = hidropricin (Re - 0,54) Molekulatömege 930, FAB-MS módszei'rel mérve. A fentiekben leírt szerkezetfelderítési módszerekkel megállapított szerkezete a III. általános képletnek felel meg (3. ábra), (ahol Rí = butil-csoportot jelent) tehát a 18-as szénatomhoz ezúttal a cukor rész helyett hidrogén-atom kapcsolódik. 6. ) Bz = himipricin (Re = 0,56) és Bz = himetipricidin (Re - 0,58) FAB-MS módszerrel mért molekulatömegük a felírt sorrendben: 944 illetve 960. Az 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
