196425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás primicin komponenseinek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
7 196425 8 előzőekben ismertetett szerkezetfelderítési módszerekkel megállapítottuk, hogy a Bi komponens homológjai, a Bz egy CH2-CS0- porttal, a Bs két CH2-csoportttal hosszabb oldalláncot tartalmaz, tehát a III. általános képletben Ri = pentil-, illetve hexil-csoportot jelent. Az egyes komponensekre a szokásos fizikai jellemzők (op, elemanalizis, optikai forgatóképesség, UV- és IR-spektrum, stb.) külön-külön nem jellemzőek, pl. egyes komponensek op-ja: 160-170 °C közé esik, keverékük op.ja 167-168 °C. Az elemanalizis értékei szintén nem jellemzőek az egyes komponensekre, mivel a komponensek hasonló szerkezetűek, nagy molekulatömegűek, ezért a kapott különbségek a komponensek többségénél a mérési hibahatárokon belül maradnak. A kinyert komponensek közül az Ai, Bi és Ci szerepel a legnagyobb mennyiségben a primicin anyag-keverékben, ezért ezeket fő-, vagy major-komponenseknek nevezzük. A kisebb mennyiségben jelen levő többi komponens neve: minor-komponensek. A találmányunk szerinti elválasztás során a kinyert komponenseket a különböző sók formájában kaphatjuk meg, attól függően, hogy milyen anyagkeverékböl indultunk ki. Amennyiben a kiindulási szétválasztandó anyagkeverék primicinszulfát volt, a primicin-komponenseket is szulfát.-só formájában kapjuk meg. Ha viszont a szulfáttól eltérő egyéb só, általában gyengébb szerves sav anionját tartalmazó só, például primícinacetát a kiindulási anyag, akkor az az elválasztás során cserebomlást szenved, és az alkalmazott futtatószerben lévő savak minőségétől függően valamely erősebb sav anionját tartalmazó sóvá alakul, pl. az acetát monoklóracetáttá, vagy formiáttá, stb. A szulfátsó formájában kinyert primicin-komponensek különböző szerves és szervetlen savakkal más sókká alakíthatók, például megfelelő báriumsók felhasználásával a T/40808 számon közzétett magyar szabadalmi leírásban található módon. A találmányunk szerinti eljárással előállított primicinkomponensek mindegyike kiváló antibakteriális hatással rendelkezik, mind a kilenc izolált anyag esetében a minimális gátló koncentráció (MIC) értéke Bacillus subtilis ATCC 6633 tesztorganizmuson mérve 0,05-0,25 pg/ml között van. Az egyes komponensek MIC (jug/ml-ben) a következők: Ai = 0,25 A2 = 0,05 A3 = 0,05 Ci = 0,25 C2 = 0,10 C3 = 0,10 Bi = 0,25 B2 = 0,25 Bs = 0,25 Ezért bármelyik primicin-komponens önmagában is alkalmas arra, hogy antibakteriális hatású gyógyászati készítmény hatóanyaga legyen. A primicin-antibiotikumnak valamely, a találmányunk szerinti eljárással nyert komponensét 0,001-10%-nyi mennyiségben a gyógyászati készítmények előállításánál szokásosan alkalmazott töltő-, hígító- és formulázási segédanyagok 90-99,999%-nyi menynyiségének felhasználásával gyógyászati készítménnyé készítjük ki, előnyösen kapszula, tabletta, porkeverék, kenőcs, gél, szuszpenzió, szirup, steril oldat, stb. formájában. A találmányunk szerinti eljárás részleteit az alábbi példákban ismertetjük. 1. példa Primicin anyagkeverék elválasztása fémsóval impregnált szilikagél töltetű oszlopon A kromatografáló oszlop elkészítése: 40 g ezüstnitrátnak 500 ml acetonitrillel készült oldatában szuszpendálunk 200 g Kieselgel HF254 típusú szilikagélt, majd az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk. Az ily módon impregnált szilikagélt 500 ml kloroformban szuszpendáljuk és buborékmentesen a megfelelő méretű kromatografáló oszlopba töltjük. Az ülepedés és a tömörítés elősegítése enyhe túlnyomás (111,4-253,3 kPa) alá helyezzük a rendszert, a gélágy magasságának állandósulásáig. Az ezüstnitrát fény hatására történő redukciójának megakadályozására alufóliával vonjuk be az oszlopot. .4 kromatografélás kivitelezése: Frissen elkészítjük az eluenst, 15 tömegrész monoklórecetsavat tartalmazó kloroform : metanol : viz : formaldehid : n-butancl = 125 : 53 : 9 : 3 : 3 térfogatarányú oldószerelegyet. Ezen oldószerelegy 12 ml-ében feloldunk 400 mg primicin-acetátot (előállítása a T/40808 számon közzétett magyar szabadalmi leírás szerinti eljárással törénik). Az oldatot óvatosan az oszlop tetejére töltjük és enyhe túlnyomással (111,4 kPa) a gélágyra abszorbeáltatjuk. A töltet tetejére 30 ml eluenst rétegezünk, majd az oszlop zárása után megkezdjük az elúciót, melyet 1,1 ml/perc térfogatárammal folytatunk, 152-253,3 kPa túlnyomás alatt. Feldolgozás: A 10 ml-es frakciókban levő anyagokat VRK-s futtatással ellenőrizzük. A Kieselgel 60 F2M (Merck) lapon a cseppenkénti pontokra 10 pl mennyiségeket viszünk fel az egyes frakciókból és 16 cm hosszon telítetlen kamrában futtatjuk kloroform : metanol : : hangyasav : víz : formaldehid : n-butanol = 130 : 53 : 6 : 9 : 3 : 3 arányú elegyé-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
