196365. lajstromszámú szabadalom • Eljárás leukotrién antagonista karbonsav származékok és ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
11 196 365 12 dizálása céljából. A B vegyüld és a mepiramin diszszociációs állandóját (Kjg) ezekből az adatokból határozzuk meg Arunlakshana és Schild (Brit. J. Pharmacol. 14, 48, 1959) szerint. A vizsgálatok egy részében, amikor az antigén (OA) hatására kialakuló összehúzódási választ határozzuk meg, a szöveteket 0,01 /xg/ml OA antigén adagolása előtt vagy kezeletlenül hagyjuk, vagy I /intól B vegyülettel és 1 /intól A vcgyülcttel (külön vagy kombinációban) kezeljük. A vizsgálatok egy másik részében a B vegyület helyett mepiramint (10 /xmól) és az A vegyüld helyett az A vegyület racemátját (1 /xmól) alkalmazzuk. Az OA-ra adott összehúzódási választ 15 percen át mérjük, ezután muszkarin-agonistát, karbacholt (10 /intól) adagolunk a maximális összehúzódás elérésére. Az OA-ra adott összehúzódási válaszokat a karbachol standarddal kiváltott válasz %-ában fejezzük ki. 2. Izolált humán hörgőn Balesetesek féltüdejét a donorok transzplantációra szolgáló szerveinek kivételével egyidőben eltávolítjuk. A parenchimás szöveteket óvatosan levágjuk a tüdőn kívüli íégutakról, mielőtt a második és a hetedik generáció közötti légúti szakaszokat eltávolítjuk. A hörgőkről levágjuk a felesleges szövetet, hosszanti irányban csíkokká nyitjuk szét azokat, majd szervfürdőben szuszpendáljuk. A humán hörgőket passzívan szcnzibilizáljuk humán immunglobulin E (IgE) szérummal (2,8 /xg/ml) 30 percig való kezeléssel. A szöveteket ezután alaposan kimossuk, 30 percig a hordozóval, illetve a megfelelő antagonistávaí kezeljük, majd antihumán birka RgE-vel választ váltunk ki. A vizsgálatban leukotrién antagonistaként a mepiramint (10 /xmól) alkalmazzuk. Az antigén hatására adott választ az előzőekben az izolált tengerimalac-légcsövön végzett vizsgálatnál leírtak szerint határozzuk meg. B) In vivo vizsgálatok 1. Éber tengerimalacokon A B vegyület, az A vegyület racemátja és a mepiramin vizsgálatára éber OA-val szenzibilizált tengerimalacoknál Herxheimer módosított módszerét alkalmazzuk. Eszerint az állatokat felfordított 9 literes üvegharangba helyezzük, amely aeroszolos kamraként szolgál. A kamra DcVilbiss No. 40 üveg acroszolkészülékkel van felszerelve, amely 5 psi nyomáson 340 /xl/perc számított sebességgel viszi be az aeroszolt. A különböző antagonisták hatásának vizsgálatára az OA-val szenzibilizált tengerimlacokat az aeroszolkamrába helyezzük és 1 percig a kiválasztott anyag 0,1 %-os oldatából képzett aeroszol hatásának tesszük ki. A különböző antagonisták hatásának vizsgálata céljából az állatokat ezután a 0,1 %-os OA aeroszollal való ingerlést megelőzően 59 percig (1. vizsgálat), illetve 4 percig eltávolítjuk a kamrából (2. vizsgálat), s utána visszahelyezzük őket. A tengerimlacok addig kapják az antigén aeroszolt, míg asztmaszerű hörgőösszehúzódás (azaz köhögés és nehézlégzés) jelentkezik, illetve az adagolást 6 percig folytatjuk, ekkor a vizsgálatot befejezzük. A nehézlégzés kezdetének idejét (mp) védőanyaggal való kezelés előtt és után határozzuk meg. A nehézlégzés kezdetéig eltelt időtartam meghosszabbodása az antagonista hatásosságára jellemző. Az állatokat gyorsan eltávolítjuk a kamrából és szükséges esetben felélesszük őket. Az előzőekben bemutatott, izolált tengerimalaclégcsövön végzett in vitro vizsgálatok alapján a B vegyület (1 /xrnól) és a mepiramin (10 /xmól) késleltetik az OA által indukált összehúzódást, de a végső, maximális válaszra nincsenek hatással. Ezzel ellentétben sem az A vegyület (I /xrnól), sem racemátja (1 /xrnól) nincs hatással az OA által előidézett összehúzódás kezdeti szakaszára (0—5 perc), de mindkét vegyület csökkenti a válasz erősségét a kései fázisban (5-15 perc) a karbachol által kiváltott válasz erősségének 50— 60 %-áról annak 30-35 %-ára. Az OA-ra adott válasz csaknem megszűnik (a karbachol által indukált válasznak csak 10 %-a marad meg), ha a szövetet az A vegyület (1 /xrnól) és a B vegyület (1 /xrnól), illetve az A vegyület raccmátjának (1 /xmói) és a mepiraminnak (10 /xrnól) a kombinációjával előkezeljük. Az izolált humán hörgőn végzett vizsgálatban a mepiraminnak (10 /xrnól) és az A vegyület racemátjának (10 /xrnól) a kombinációja az anti-IgE-re adott választ csaknem megszünteti (a karbachol által indukált összehúzódásnak csak 15 %-a marad meg). Az ismertetett in vivo vizsgálatok egyikében az aeroszolizált OA-val való ingerlést megelőzően 59 perccel az aeroszolizált B vegyület racemát (0,1 %-os oldat 1 percig) az OA által előidézett nehézlégzés kialakulásának időtartamát 65 mp-ről (kontroll) 180 mp-re (kezelt) növeli. A B vegyület (0,1 %-os oldat, I perc) 60 perccel az aeroszolizált OA-val való ingerlés előtt adagolva az OA által indukált nehézlégzés kialakulásának időtartamát 65 mp-ről (kontroll) 230 mp-re (kezelt) növeli, a mepiramin (0,1 %-os oldat) a nehézlégzés kialakulásának időtartamát 105 mp-re emeli. Másik kísérletsorozatban OA-val szenzibilizált tengerimalacokat a következő kombinációk aeroszolja hatásának teszünk ki 1 percig: A vegyület racemát (0,1 %) + mepiramin (0,1 %), illetve A vegyület racemát (0,1 %) + B vegyület (0,1 %). Az előkezelés után 4 perccel az állatokat aeroszolizált OA-val (0,1 %) ingereljük. A kísérletben az első kombináció az OA által indukált nehézlégzés kialakulásának időtartamát 60 mp-ről (kontroll) 190 mp-re (kezelt) növeli, a második kombináció sokkal hatásosabb, ez az időtartamot 340 mp-re növeli. A találmány szerint előállított gyógyászati készítmények gyógyászatilag elfogadható hordozóanyagot vagy hígítószert és az (l) általános kcplctű vegyületnek, illetve gyógyászatilag elfogadható sójának hisztamin-Hi receptor-antagonistával alkotott kombinációját is tartalmazzák, olyan mennyiségben, amely elegendő az antigén által indukált légzési anafilaxia gátlásához. A következő példák a találmányunk szerinti vegyületek előállítását és ezeknek gyógyászati készítményekben való alkalmazását mutatják be bárminemű korlátozás nélkül. 5 1C 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
