196230. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polién antibiotikum származékok vízoldható és stabilis formáinak és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására és antifugális hatású növényvédőszer
1 5. példa Nisztatin-gamma-CD komplex előállítása heterogén fázisban liofilezéssel. 8 g gamma-CD-t (nedvességtartalom: 1,5%) 80 ml vízben oldunk 40 °C-on, majd 2 g nisztatint (biológiai aktivitás: 5033 E/mg) adunk hozzá. A hőmérsékletet 40 °C-on tartva a szuszpenziót 24 órán át keverjük, majd a kapott elegyet liofilezéssel vízmentesítjük. A kapott termék 10 g világos sárga színű laza por, hatóanyagtartalom (spektrofotometriásán mérve) 20%. Biológiai aktivitása: 950 E/mg. A termékben a nisztatin: gamma-CD mólarány 1:3. Rőntgendiffrakciós vizsgálatok szerint az így nyert komplex amorf szerkezetű. A hasonló módon, de gamma-CD nélkül kezelt alapanyag kristályos volta megmarad, pordiagramja teljesen azonos a kiindulási anyagéval, biológiai aktivitása azonban számottevően leromlik. Amennyiben magasabb hatóanyagtartalmú komplexet készítünk a fenti módszer szerint, akkor a röntgendiffrakciós pordiagramon már megjelennek a kristályos nisztatinra jellemző csúcsok is. A komplex kioldódási vizsgálata: 500 mg (5. példa szerint előállított) nisztatin-gamma-CD komplexet 10 ml vízben 5 percig keverünk szobahőmérsékleten, a szűrletben spektrofotometriásán 4,5 mg/ml oldott nisztatin koncentráció mérhető. 6. példa Az Amphotericin B-gamma-ciklodextrin komplex előállítása a következőképpen történt: 10 g gamma-ciklodextrint (víztartalma: 1,5%) 90 ml desztillált vízben oldottunk 37 °C-on, majd 200' mg Amphotericin B-t adunk az oldathoz és 2 órán keresztül intenzíven kevert ettük. Ezután leszűrtük, a kapott sárga színű oldatot liofilezéssel vízmentesítettük. A kapott termék 10 g, Amphotericin B tartalma spektrofotometriásán mérve 0,6—0,8 tömeg%. Az Amphotericin B-gamma-ciklodextrin komplex laza, sárga színű por, vízben gyorsan, tisztán oldódik, a vizes oldat Amphotericin B koncentrációja 0,6—0,8 mg/ml, és az így kapott oldat vízzel, illetve izotóniás oldattal korlátlanul hígítható anélkül, hogy az oldatból szilárd anyag kicsapódna, vagy zavarodás lépne fel. Ez az oldat szobahőmérsékleten 6 napon keresztül tárolva spektrofotometriásán semmiféle mérhető hatóanyagtartalom változást nem mutatott. 7. példa A polién antibiotikumok gamma ciklodextrin komplexeinek hatástani vizsgálata Az előzőekben leírtak bizonyítják, hogy a gamma-ciklodextrinnel zárványkomplexet képezve a polién antibiotikumok stabilitása és vízoldékonysága igen jelentősen megnő. A döntő kérdés azonban az, hogy az antifungális hatás is megmarad-e? Ezért vizsgáltuk a különbözőképpen előállított komplexek antifungális hatását azok előállítása után, amikor is a komplexképzéssel nem védett hatóanyag már jelentős aktivitáscsökkenést mutatott. a) A flavofungin gamma-ciklodextrin komplex vizes oldatának az antifungális hatását 6 sarjadzó és 13 fonalas tesztgombán vizsgáltuk. Az eredményeket a 7. táblázat szemlélteti. A minimális gátló koncentráció 10—25 ng/ml volt minden esetben a flavofungínra számítva, ami megfelel a nem komplexált hatóanyag hatékonyságának. Különösen figyelemre méltó, hogy a fitopatogen fusáriumok ellen is hat az anyag, ami indokolttá teszi a növényi gombakártevők elleni alkalmazást. A komplexált anyag fiavofunginnal azonos koncentrációban hatékony, A vizsgálatokat agar-diffúziós módszerrel végeztük. A komplex előnye, hogy az oldatkészítéshez szerves oldószer alkalmazása (DMF, illetve DMSO) nem volt szükséges. Ugyanis ilyen oldószerek bizonyos gombákra gátlólag hatnak, így alapvetően fontos dolog a mérésnél az oldószer koncentrációt megfelelő vizes hígítással, a már nem gátló érték alá csökkenteni. Gyakorlatban például 1% alatti DMSO koncentráció már megengedett. Bizonyos poliének azonban ilyen hígításban gyakran kicsapódnak, így a vizsgálatokhoz szükséges megfelelő oldat készítése sokszor problematikus. Ajánlott módszerek: az anyagok őrlése, porítása után az oldatkészítést és vizes hígítást mindig közvetlenül a mérés előtt kell elvégezni, (J. Ryley, Experimental Approaches to Antifungal Chemotherapy, in: Advances in Pharm, and Chemotherapy, No. 18, Academic Press, London, 1981). 7. táblázat Flavofungin gamma-ciklodextrin komplex minimális gátló koncentrációjának (MIC) vizsgálata in-vitro körülmények között Flavofungiti-gamma-ciklodexlrin Teszt organizmus MIC koncentráció ug/ml-ben 1. Élesztők, illetve élesztőszerű gombák Cryptococc, neoform. 78/K-16 5—10 Sacchar, cercvisiae OKI 1282 10 Candida albicans CBS 562 10 Candida tropical CBS 430 25 Candida crusei 79/K 47 10-25 Candida pseud, tr. 5-10 2. Gombák Asperg. niger CHS 12648 25 Aspcrg. fumigalus CDS 11326 25 Penicillin digitatum CDS 31948 25 Penicillin chrysogcn. CBS 19646 25-50 3. Putogén gombák Sporotr. Schcnkii CDS 34035 25 Trichoph. rubrum CBS 30338 75 Trichoph. mentagroph CBS 50148 25 Trichoph. (Keratomyc ajelloi OKI) 25 Epiderm, floccosum OKI, IV. 25 Microsp. gypseum CBS 10064 10-25 Microsp. persic OKI 25 . 4. Növénypatogén gombák Fusarium monitiform DSM-IMB 11778 10—25 Fusarium oxysporum DSM-IMB 10975 10—25 9 196230 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
