196230. lajstromszámú szabadalom • Eljárás polién antibiotikum származékok vízoldható és stabilis formáinak és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására és antifugális hatású növényvédőszer
1 196230 2 kiindulási nisztatin biológiai aktivitásával arányos aktivitást mutat. A termogravimetriás, a Differenciál Scanning Calorimetriás (DSC) illetőleg a Thermal Evolution Analysis (TEA) vizsgálatok jellegzetes különbségeket mutattak a nisztatin, a nisztatin-gamma-CD komplex illetőleg a nisztatin-gamma-CD keverék között. A nisztatin 3%-nyi vizet tartalmaz, amelyet 100 °C-ig ad le (TG görbe). Az anyag bomlása 150 °C-on indul meg, egy éles exoterm folyamattal (DSC görbén 165 °C-os csúcs), mely során 8%-os tömegváltozás mérhető (TG-görbe), majd lassú bomlási folyamat következik és 350 °C-ig 54%-os tömegcsökkenés mérhető. Bár a nisztatin bomlása egybeesik a gamma-CD bomlásával, ennek ellenére néhány eltérés tapasztalható a komplex és a fizikai keverék termoanalitikus görbéin, ami a liofilizált minta komplex voltára utal. A TEA görbén nem jelentkezik a 160 °C-os szervesanyageltávozásra utaló éles csúcs. A DSC görbén nem látható a komplex mintánál a 165 °C-os nisztatin bomlására jellemző exoterm csúcs, az exoterm folyamat csak 200 °C fölött indul meg. A TG görbén a különbség abban mutatkozik, hogy a liofilizált minta 250 °C fölött gyorsabban bomlik, mint a fizikai keverék. A nisztatin komplexképzését gamma-ciklodextrinnel ,3C NMR vizsgálatok is alátámasztják. Nisztatin-gamma-CD liofilizált mintából készülő oldatok stabilitási vizsgálata: 8%-os hatóanyagtartalmú komplexből 5 mg/ml koncentrációjú vizes oldatot készítettünk, az oldatokat szobahőmérsékleten fénytől nem védve tároltuk, majd különböző időpontokban az oldatok hatóanyagtartalmát spektrofotometriásán ellenőriztük. 5. táblázat Idő (nap) Nystatin koncentráció (mg/ml) 0 5,0 1 4,8 2 4,75 5 4,70 6 4,6 7 4,55 8 4,5 10 4,5 12 4,5 21 4,1 Az oldatok másnapra opálosodtak, a mintavétel az oldat összerázása után történt. 400—600-szoros, 50%-os etilalkohollal való hígítás után fotometráltuk, és a Ama* = 304± 1-nél jelentkező extinkció értékből számoltuk a Nystatin koncentrációját. Az 5. sz. táblázatban látható, hogy 3 heti tárolás után is az eredeti hatóanyagnak több mint 80%-a mérhető vissza spektrofotometriásán, vizes oldatban. Arra vonatkozóan, hogy a biológiai aktivitás milyen összefüggésben van az így mért értékkel, az irodalomban is egymásnak ellentmondó adatok találhatók. Egyes szerzők szerint a biológiai aktivitás elvesztése 4—8-szor gyorsabban megy végbe, mim az az extinkciócsökkenésből következne, mások szerint parallel csökken az aktivitás az extinkcióval. (Hamilton-Miller: J. Pharm. Pharmac. 25. 401, 1973). Saját tapasztalatunk, hogy magas extinkció értékhez magas biológiai aktivitás tartozott. 4. példa Nisztatin-gamma-ciklodextrin komplex előállítása heterogén fázisban. 9 g gamma-ciklodextrint (nedvességtartalom 1,5%) dörzsmozsárban 1 g nisztatinnal (biológiai aktivitása 5033 E/mg) homogenizáljuk, majd 6 ml 50%-os etilalkoholban a keveréket szuszpendáljuk. Néhány perc után a szuszpenzió hirtelen beszilárdul, az így kapott anyagot szétterítés és aprítás után exszikkátorban hagyjuk P2Os fölött az oldószer-víz-nyomok eltávolítása végett, majd másnap a szilárd komplexet porítjuk. A termék tömege 10 g, hatóanyagtartalma 10 tömeg%. (Biológiai aktivitása: 450 E/mg). Az igy készült komplex termoanalitikai vizsgálat során ugyanazokat az eltéréseket mutatta a keverékhez képest, mint a 3. példában a liofilizálással előállított komplex. 10 mg/ml hatóanyagnak megfelelő mennyiségű nisztatin-gamma-ciklodextrin komplex és nisztatin alapanyag oldódását vizsgáltuk 15 ml desztilált vízben 37 °C-on. Az oldatokat mágneses keverővei 150 ford/perc sebességgel kevertettük. Az oldatból különböző időközökben mintát vettünk, szűrtük, a szűrlet hatóanyagtartalmát spektrofotometriás méréssel határoztuk meg. A kapott eredményeket a 6. táblázat mutatja. 6. táblázat Idő (perc) nisztatin-gamma-ciklodextrin komplex mg/ml 2 9,0 5 7,2 15 7,8 ■ 40 7,4 60 7,2 90 6,0 A nisztaúr alapanyag vizes szuszpenziöból vett minták spektruma nem értékelhető, azt kaptuk, hogy az 5 percen belül vett minta spektruma egyezett csak a nisztatinéval, ezután fokozatos bomlás tapasztalható, először a 290 nm körüli maximum torzul, illetve tűnik el, és a kisebb hullámhosszú tartományban új maximumok jelennek meg, ami a konjugáit kromofor rendszer károsodásra utal. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 fiO 65 8
