196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 2 tározzuk a fermentlé-minták vagy a micélium kivonat minták antibiotikus aktivitását. Vizsgálati organizmusként az A 40926 antibiotikumokra érzékeny organizmusokat használhatunk fel, amilyen a Bacillus subtilis és a Streptococcus 5 aureus. A biológiai meghatározást előnyösen agardiffúziós módszerrel végezzük, agar lemezeken. A maximális antibiotikum termelés általában a fermentáció 2. és 5. napja között következik be. Az A 40926 antibiotikumot az Actinomadura 10 sp. ATCC 39727 törzs — vagy ennek egy A 40926 antibiotikumot termelő mutánsa vagy variánsa — tenyésztésével állítjuk elő. Az antibiotikum főtömegében a fermentlében van jelen. Az A 40926 antibiotikumot termelő Actinoma- 15 dura sp. ATCC 39727 törzs jellemzését a következőkben adjuk meg: Makroszkópos és mikroszkópos vizsgálat A vegetatív micélium hajlékony, elágazó tufákból áll (átmérő kb. 0,8 pm), amely egyes táptalajo- 20 kon — ezeket a III. Táblázatban csillaggal jelöljük — többnapi növekedés után enyhe tendenciát mutat a pálcaalakú elemekké való fragmentálásra, míg glükóz-aszparagin táptalajon kokkoid elemek- 25 ké fragmentál. Erre a törzsre egyes táptalajokon a vegetatív micélium borvörös színe jellemző. Légmicélium csak néhány táptalajon van jelen. Közelebbről: a III. Táblázatban feltüntetettek kö- Q zül csak zabliszt agaron és talaj agaron képződik. Ezeken a táptalajokon a légmicélium fehéres-szürke és spórahordozókat képez — amelyek sarló alakban rendeződnek el —, valamint rövid, kb. 10—20 spórából álló spirálokat. „ A spórák hengeresek és átlagos méretük 0,8 x 1,2 pm. A növekedési jellemzők meghatározása A tenyésztési jellemzők meghatározásához az Actinomadura sp. ATCC 39727 törzset különbö- 4U ző, Shirling és Gottlieb által javasolt standard táptalajokon tenyésztjük (E. B. Shirling, D. Gottlieb, Method for characterization of Streptomyces species. Int. J. Syst. Bacteriol. 16, 313—340, 1966), és ezek mellett néhány, Waksman által ajánlott tápta- 5 lajt is felhasználunk (S. A. Waksman, The Actonomycetes. The Williams and Wilkins Co., Baltimore, Vol. 2, 328—334.). A színmeghatározást, ha ez szükségesnek bizonyult, Maerz és Paul módszerének alkalmazásával 50 végeztük (A. Maerz, M. Rea Paul, A Dictionary of Color, 2nd ed., McGraw-Hill Book Company Inc., New York, 1950). Az organizmus különböző szénforrások hasznosítására irányuló képességét a Shirling és Gottlieb 55 által leírt módszerrel határoztuk meg. A tenyésztési és fiziológiai jellemzőket, valamint a szénforrás hasznosítást a III., IV. és V. Táblázatban mutatjuk be. A III. Táblázat elkészítéséhez a leolvasásokat 2 hetes, 28 °C-on végzett tenyésztés után hajtottuk végre. 65 III. Táblázat Az Actinomadura sp. ATCC 39727 törzs tenyésztési jellemzői Táptalaj 2. sz. táptalaj (élesztőkivonat-maláta agar) 3. sz. táptalaj (zabliszt agar) 4. sz. táptalaj (szervetlen só-keményítő agar) 5. sz. táptalaj (glicerin-aszparagin agar) 6. sz. táptalaj* (pepton-élesztőkivonat vas agar) 7. sz. táptalaj* (tirozin agar) Zabliszt agar* Hickey—Tresner agar* Czapek-f. glükóz agar Glükóz-aszparagin agar* Tápagar Burgonyás agar* Bennet-f. agar* Kalcium-malát agar Lefölözött tej-agar Czapek-f. szacharóz agar Tojásalbumin agar* Sabouraud-f agar Talaj agar Dextróz-tripton agar* Burgonyaszelet Jellemzők bőséges növekedés, kérges felülettel, nyomokban borostyánszínű-rózsaszínű oldható pigment (8/L/8) bőséges növekedés, sima felület, ibolyaszínű (55/ E/4), nagyon gyér szürke légmicélium, lila oldható pigment (55/H/4) mérsékelt növekedés, nagyon sima és vékony felszín, krémszínű (10/D/2) mérsékelt növekedés, sima és vékony felszín (10/B/2), sárgabarack mérsékelt növekedés, enyhén kérges felület, borostyánszínű (12/D/9) bőséges növekedés, sima és vékony felszín, borostyánszínű-barna (13/K/12) intenzív növekedés, sima felszín, borvörös (8/L/7); légmicélium mérsékelten világos-sárgásszürke (44/ B/2) intenzív növekedés, ráncos felület, borostyánszínűbarna (13/K/12) mérsékelt növekedés, sima felület, világossárga (9/1/3) gyér növekedés, krémszínű felszín, szalmasárga (9/E/l) intenzív növekedés, ráncos felület, világossárga (11/ C/7) intenzív növekedés, ráncos felület, borvörös (8/L/9) intenzív növekedés, kérges felület, borvörös (8/L/9); mély borostyán-rózsaszínű oldható pigment (5/J/10) mérsékelt növekedés, sima felszín, sárgabarack (10/ E/3) intenzív növekedés, enyhén ráncos felület, narancs (9/B/9) intenzív növekedés, sima felület, sárgabarack (10/ B/6) intenzív növekedés, sima felület, rózsaszínű oldható pigment nyomok (52/B/3) nincs növekedés gyér növekedés, színtelen; fehéres-sárga légmicélium mérsékelt növekedés, sima és vékony felület, világossárga (10/C/2) intenzív növekedés, narancs-barna; nyomokban fehéres-szürke légmicélium 10
