196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

196229

eluálás: lineáris grádiens 5%—60% között (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc UV detektor: 254 nm

belső standard: teikoplanin A2 2 komponens 5

(Gruppo Lepetit S. p. A.)

E) az elem-analízis — a minta előzetes, kb. 140 °C-on közömbös atmoszférában való szárítása után (súlyveszteség 9,6%) — a következő közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 10 54,09; hidrogén 5,13; nitrogén 6,34; klór (összes)

4,12; klór (ionos) 0,39%.

Szervetlen maradék 900 °C-on levegőn végzett szárítás után: 5%.

F) Sav-bázis titrálási görbe 2-metoxi-etanol 15 (MCS): víz 4:1 elegyben; a HCl-felesleg hozzáadása után (pH 2,7) KOH-dal végzett titrálás 4 ionizálható funkció jelenlétére mutat, amelyek pkMcs értékei a következők: 4,5; 5,6; 7,2; 9,2.

G) Rf érték 0,21 és a teikoplanin A2 2 kompo- 20 nenséhez viszonyított Rf érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben:

5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2S04 70

acetonitril 30

szilanizált szilikagél lemezek (60 F254 Merck, réteg- 25 vastagság 0,25 mm)

Kimutatás:

— UV fény

— Pauly-reagenssel — azaz diazotált szulfanilsavval (J. Chromatogr. 20, 171, 1965; és Z. 30 Physiol. Chem. 292, 99, 1953) sárga szín

— bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 felhasználásával, Davis-f. táptalajon

H) Molekulatömeg kb. 1730 a FAB—MS spektrum alapján, amely az M + H+ csúcsot 1731-nél 35

mutatja.

Az A 40926 antibiotikum B0 faktor fizikokémiai jellemzői

A) a 14. ábrán bemutatott UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

lambdamax (nm)

a) 0,1N HC1

b) pH 7,38 foszfát puffer

c) 0,1N nátrium- vagy káliumhidroxid

d) pH 0,9 foszfát puffer

e) metanol

282

281, 300 (váll) 300

283; 300 (váll) 282

B) a 15. ábrán bemutatott IR abszorpciós spektrum a kővetkező abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1):

3700—3080; 3080—2700 (nujol); 1720—1625; 1625—1560; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1295; 1230; 1210; 1150; 1100—1040; 1030; 1015; 970; 890; 840; 810; 720 (nujol)

C) a 16. ábra szerinti ‘H—NMR spektrum a következő jel-csoportokat (ppm) mutatja 270 MHzen, DMSO—d6-ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként TMS-t (0,00 ppm) alkalmazva; delta, ppm:

0,85 (d, izopropil-metilek); 1,15 (kb. 13H); 1,44 (kb. 2H); 2,02 (2H); 2,32—2,35 (3H); 4—6,1 (kb. 16H); 6,1—8 (kb. 23H); 8,52; 9,50; 9,68 (széles sávok, mozgékony protonok);

2,5—4: interferencia a H20 csúcsok miatt

D) retenciós idő (R,) 1,22 a teikoplanin A2 2

40

45

50

55

60

65

komponenséhez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) fordított fázisú HPLC technikával a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman)

4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm)

A eluálószer:

CH3CN

10%

NaH2P04 • H20 (2,5 g/1)

90%

pH 6,0-ra beállítva

B eluálószer:

CHjCN

70%

NaH2PÖ4 • H20 (2,5 g/I)

30%

pH 6,0-ra beállítva

eluálás: lineáris grádiens 5%—60% között (B eluálószer az A oldószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc

UV detektor: 254 nm

belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.)

E) az elem-analízis — miután a mintát előzetesen kb. 140 °C-on közömbös atmoszférában szárítottuk (tömegveszteség 9,6%) — a következő közelítő (átlagos) százalékos összetételt mutatja: szén 54,09%; hidrogén 5,13%; nitrogén 6,34%; klór (összes) 4,12%; klór (ionos) 0,39%.

Szervetlen maradék 900 °C-on levegőn végzett izzítás után: 5%.

F) A sav-bázis titrálási görbe 4:1 2-metoxi-etanol (MCS): víz elegyben — HCl-felesleg hozzáadása után KOH-dal végzett titrálással — 4 ionizálható funkció jelenlétére mutat, amelyek pkMcs értékei a következők: 4,5; 5,6; 7,2; 9,2.

G) Az Rf érték 0,21 és a teikoplanin A2 2 komponenséhez viszonyított Rf érték 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben:

5%-os (tömeg/térf.) Na2SŰ4 70%

acetonitril 30%

szilanizált szilikagél lemezeket (60 F254 Merck, rétegvastagság 0,25 mm) alkalmazva Kimutatás:

— UV fény

— Pauly-reagenssel — azaz diazotált szulfanilsavval (J. Chromatogr. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) sárga szín

— bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, Davis-f. minimális táptalajon.

H) A molekulatömeg kb. 1730 az FAB—MS spektrum alapján, amely szerint az M-í:H+ csúcs 1731-nél helyezkedik el.

Az A 40926 antibiotikum PA faktor fizikokémiai jellemzői:

A) a 17. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja:

a) 0,1N HC1

b) O.IN KOH

c) pH 7,38 foszfát puffer

d) pH 9,f foszfát puffer

lambdam ax (nm)

282

300

282; 300 (váll) 283; 300 (váll)

B) a 18. ábra szerinti IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1):

3700—3100; 3000—2800 (nujol); 1760—1710; 1655; 1620—1550; 1505; 1460 (nujol); 1375 (nujol); Í2őü; 1250—950; 845; 805; 720 (nujol)

16