196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 196229 C) a 19. ábra szerinti 'H—NMR spektrum a következő jel-csoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-nél DMSC—cU-ben (hexadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként TMS-t (0,00 ppm) alkalmazva (delta, ppm): 0,86 (CH3-dublettek); 1,15—1,22 [m, (CH2),,]; 1,41 (m, CH2); 2,01 (s, CH3); 2,01 (m, CH2); 2,28 (s, N—CH3); 4,26—5,96 (széles, peptid- és aromás metilek); 6,33—7,73 (széles, aromás CH-csoportok és peptid-NH-csoportok) D) retenciós idő (Rt) 1,15 a teikoplanin A2 2 komponenshez (R, = 20,3 perc) viszonyítva fordított fázisú HPLC módszerrel a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer: CH3CN 10% NaH2P04-H20 (2,5 g/1) 90% pH 6,0-ra beállítva eluálószer: CH3CN 70% NaH2P04H20 (2,5 g/1) 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris grádiens 5%— 60% között (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.) E) az Rf érték 0,62 a teikoplanin A2 2 komponenshez viszonyítva a következő kromatográfiás rendszerben: 5%-os(tömeg/térf.) vizes Na2SC>4 70 acetonitril 30 szilanizált szilikagél lemezek (60 F234 Merck, rétegvastagság 0,25 mm) Kimutatás: — UV fény — Pauly reagenssel-diazotált szulfanilsav (J. Chromatogr. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) — sárga szín — bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, Davis-f. minimális táptalajon. F) Molekulatömeg kb. 1758 az FAB—MS spektrum alapján, amelyen számos csúcs látható, a legintenzívebb 1761-nél. Az FAB—MS elemzés műveleti körülményei a következők: berendezés: VG Mod ZAB SE, FAB ágyúval (Ion Tech) ellátva körülmények: pozitív FAB, Xe gyorsítófeszültség 8 kV mátrix: tioglicerin:glicerin 1:1 (térf./ térf.) Az A 40926 antibiotikum PB faktor fizikokémiai jellemzői A) a 20. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja: lambdaTM« (nm) a) 0,1N HC1 282 b) 0,1N KOH 300. c) pH 7,38 foszfát puffer 282; 300 (váll) d) pH 9,0 foszfát puffer 282; 300 (váll) 2 B) a 21. ábra szerinti IR abszorpciós spektrum a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm-1): 3700—3100; 3000—2800 (nujol); 1760—1710; 1655; 1620—1560; 1605; 1480—1420 (nujol); 1375 (nujol); 1320-1270; 1230-1190; 1150; 1120— 920; 845; 810; 720 (nujol) C.l. a 12. ábra szerinti lH—NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél DMSO—ds-ban (hexadeutero-dimetilszulfoxid) felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t használva (delta, ppm): 0,84 (d, izopropil-metilek); 1,17 [m, (CH>)„]; 1,43 (m, CH2); 1,99 (s, CH3); 2,01 (m, CH2); 2,31 (s, N—CH3); 2,79 (dd, CH); 3,70 (m, CH); 4,06-6,02 (széles, peptid és aromás CH-csoportok); 6,45—7,74 (széles, aromás CH-csoportok és peptid NH-csoportok); 8,19—9,99 (széles, peptid NH- csoportok és fenolos OH-csoportok) C.2. a 23. ábra szerinti 'H—NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 270 MHz-nél, DMSO—d6 + CF3COOD közegben felvéve, belső standardként (0,00 ppm) TMS-t alkalmazva (delta, ppm): 0,84 (d, izopropil-metilek); 1,13 [m, (CH2),,]; 1,40 (m, CH2); 1,98 (s, CH,); 2,00 (m, CH2); 2,92 (dd, CH); 3,29—3,71 (m, cukor-CH-csoportok); 4,07—6,09 (s és m, peptid és aromás CH-csoportok); 6,45—7,83 (s és m, aromás CH-csoportok és peptid NH-csoportok); 8,17—10,38 (peptid NH-csoporlok, fenolos OH-csoportok) D) retenciós idő (R.) 1,27 és 1,32 a teikoplanin A2 2 komponenshez viszonyítva (Rt = 20,3 perc) a fordított fázisú HPLC technikával a következő körülmények között végzett elemzés során: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) x 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) A eluálószer: CH3CN 10% NaH2P04-H20(2,5g/l) 90% pH 6,0-ra beállítva B eluálószer: CH3CN 70% NaH2P04 H20 (2,5 g/1) 30% pH 6,0-ra beállítva eluálás: lineáris grádiens 5%—60% között (B eluálószer az A eluálószerben), 40 perc alatt áramlási sebesség: 1,8 ml/perc UV detektor: 254 nm belső standard: teikoplanin A2 2 komponens (Gruppo Lepetit S. p. A.) E) Rí érték a teikoplanin A2 2 komponenséhez viszonyítva 0,53 a következő kromatográfiás rendszerben : 5%-os (tömeg/térf.) vizes Na2S04 70 acetonitril 30 szilanizált szilikagél lemezek (60 F254 Merck; alkalmazásával (rétegvastagság 0,25 mm) Kimutatás: — UV fény — Pauly reagenssel — diazotált szulfanilsav (J. Chromatogr. 20, 171, 1965 és Z. Physiol. Chem. 292, 99, 1953) sárga szín — bioautográfia Bac. subtilis ATCC 6633 alkalmazásával, minimális Davis-f. táptalajon. F) Molekulatömeg kb. 1772 az FAB—MS spektrum alapján, amelyen számos csúcs látható, a 5 10 15 20 25 3G 35 40 45 50 55 60 65 I7
