196229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 40926 antibiotikum N-acilamino-glukuronil-aglikonjai és az A 40926 antibiotikum aglikonjai, valamint az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
196229 2 1 ‘ A találmány tárgya: eljárás új antibiotikumok — nevezetesen az A 40926 antibiotikum AB komplex N-acilaminoglukuronil-aglikonja, az A 40926 antibiotikum A faktor N-acilaminoglukuronil-aglíkonja, az A 40926 antibiotikum Bo faktor N-acilaminoglukuronil-aglikonja, az A 40926 antibiotikum Bi faktor N-acilaminoglukuronil-agiikonja, az A 40926 antibiotikum aglikonja — és ezek addíciós sói előállítására, az A 40926 antibiotikum komplexből vagy ennek valamelyik faktorából kiindulva. Az új antibiotikumok alkalmasak fertőző betegségek kezelésére, amelyek a rájuk érzékeny mikroorganizmusokkal kapcsolatosak. Az A 40926 antibiotikum komplex és ennek faktorai Gram-pozitív baktériumok és Neisseria törzsek ellen aktív antibiotikumok, amelyeket Actinomadura törzsek termelnek. Az Actinomadura genushoz tartozó egyik, A 40926 antibiotikum komplexet termelő törzset 1984. június 8-án helyeztük letétbe az American Type Culture Collection-nél (ATCC, Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok), a Budapesti Szerződés előírásai szerint. Az A 40926 antibiotikumot és faktorait, az ezeket termelő mikroorganizmusokat és az előállításukra irányuló eljárást a 177882 számú, 1986. április 16-án közzétett európai szabadalmi bejelentés ismerteti. A flzikokémiai adatok alapján és ismert antibiotikumok szerkezetére való hivatkozással az A 40926 faktoroknak az (I) általános képlet tulajdonítható (a számozás analóg azzal, amelyet J. Williams a J. A. C. S. 106, 4895—4908, 1984 helyen javasol); e képletben A jelentése N-(ll—12 szénatomos)-acilaminoglukuronil-csoport és B jelentése mannozil- vagy acetil-mannozil-csoport. Közelebbről: — az A 40926 antibiotikum A faktor olyan előbbi képletű vegyület, amelyben A jelentése undekanoilaminoglukuronil-csoport és B jelentése mannozil-csoport; — az A 40926 antibiotikum Bo faktor olyan előbbi képletű vegyület, amelyben A jelentése izododekanoilaminoglukuronil-esoport és B jelentése mannozil-csoport és — az A 40926 antibiotikum Bi faktor olyan előbbi (I) általános képletű vegyület, amelyben A jelentése dodekanoilaminoglukuronil-csoport és B jelentése mannozil-csoport. Az A 40926 antibiotikum PA és PB faktor abban különbözik a megfelelő A és B faktortól, hogy bennük a mannóz-egység helyett acetil-mannóz egység van jelen. Az A 40926 antibiotikum a komplex antibiotikumok közé tartozik; 5 komponensét különítették el, amelyeket PA, PB, A, B, és B0 faktorként azonosítottak. Legalábbis bizonyos fermentációs körülmények között az A 40926 antibiotikumot termelő törzsek fő terméke az A 40926 antibiotikum PA és PB faktor. Az A 40926 antibiotikum A és B faktor elsősorban az A 40926 antibiotikum PA ill. PB faktor átalakulási terméke és gyakran már a fermentlében jelen van. Azt találták, hogy az A 40926 antibiotikum PA faktor'bázisos körülmények között átalakítható A 40926 antibiotikum A faktorrá, az A 40926 antibiotikum PB faktor pedig A 40926 antibiotikum B faktorrá. Következésképp: ha egy fermentlevet vagy egy ebből előállított, A 40926 antibiotikumot tartalmazó kivonatot vagy koncentrátumot bizonyos ideig bázisos körülmények között állni hagyunk (pl. pH 9 felett, egy nukleofil bázis vizes oldatában egy éjjelen át), olyan A 40926 antibiotikum komplexet kapunk, amely A 40926 antibiotikum A és B faktorban feldúsult. A leírásban és az igénypontokban az „A 40926 antibioti kum N-acilaminoglukuronilagli konj ai ” kifejezés az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon AB komplexre és/vagy ennek egy faktorára utal, amilyen az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon A faktor, A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon B faktor, A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon Bo faktor és az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-aglikon Bi faktor. Az A 40926 antibiotikum N-acilaminoglukuronil-ag/ikon AB komplex (nem-addíciós só alakban) a következő jellemzőket mutatja: A) az 1. ábra szerinti UV abszorpciós spektrum, a következő abszorpciós maximumokkal: lambdamax (nm) a) 0,1N HC1 282 b) pH 7,4 foszfát puffer 282, 310 (váll) c) 0,1N KOH 302 B) a 2. ábra szerinti IR spektrum, a következő abszorpciós maximumokkal (cm-1): 3700—3100; 3000—2800 (nujol); 1650; 1620— 1550; 1500; 1460 (nujol); 1375 (nujol); 1300; 1250—1180; 1150; 1060; 1010; 970; 930; 840; 820 C) a 3. ábra szerinti 'H—NMR spektrum, amely a következő jelcsoportokat (ppm-ben) mutatja 270 MHz-en, DMSO—d6 (hexadeutero-dimetilszulfoxid) és CF3COOH elegyében felvéve, belső standardként TMS-t (0,00 ppm) alkalmazva (delta, ppm): 0,84, d és i (izopropil-CH3-ek és terminális CH3); 1,14, m [(CH2)„J; 1,44, m (—CH2—C—CO és izopropil—CH); 2,00, t (—CH2—CO); 2,5, s (DMSOdí); 2,5, s (N-CH,); 2,93, m (CH, (22)]; 3.33, m [CH, (Z’2)]; 3,20—3,80, m (cukor CH-k); 5.34, d (az acilaminoglukuronsav anomer protonja); 4,10, m (X6); 4,33, d (X5); 4,43, d (X7); 4,9, m (X2); 5,1 (4F és Z6); 5,4, s (XI); 5,58, d (X4); 5,7, s (4B); 6,06, d (X3); 7,73, s (6B); 6,26-8,42, s és m (aromás CH-k és pepiid NH-k); 8,70—10,5, széles s (fenolos OH-k és NH2) d = duplett m = multiplen s = szingulett t = triplett D) retenciós idő (Rt) 1,20 és 1,30 a teikoplanin A2 komponenshez (Rt = 20,3 perc) viszonyítva, fordított fázisú HPLC-vel meghatározva, a kővetkező körülmények között: oszlop: Ultrasphere ODS (5 pm/Altex/Beckman) 4,6 mm (belső átmérő) X 250 mm elő-oszlop: Brownlee Labs RP 18 (5 pm) 5 10 16 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
