196217. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új vinblasztin-fehérje konjugátumok és származékaik, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
196 217 2 aminocsoportja cs az adott esetben szubsztituált hemiaszpartát vagy hemi-glutamát aktivált észtercsoportja között kovalens kötés alakul ki. A szarvasmarha szérum albumin például 56 lizin-aminocsoportot tartalmaz. A fchcrjcmolckulánként kapcsolódó vinblasztin molekulák száma függ a reakciókörülményektől cs értéke általában 1 és 34 közötti érték. Az aktiválást ismert eljárások szerint végezzük, így például klór-hangyasavas alkil-észtcrrcl, előnyösen etil- vagy izobutil-észtcrrel. A kondenzációt in situ, az aktivált anhidridet tartalmazó rcakcióclcgybcn végezzük, bár kondenzáció előtt az aktivált anhidridet izolálhatjuk is. A találmány szerinti eljárással nyert konjugáíumot ismert eljárások szerint izoláljuk. Eljárhatunk úgy. hogy a konjugátumot acetonnal kicsapjuk, centrifugáljuk, mossuk, liofilizáljuk, majd gélszűrésse! tisztítjuk. Kívánt esetben az így kapott konjugátumot mégszukcinálhatjuk is, hogy a konjugált és ncm-konjugált fehérjéknél ismert aggregációs problémákat elkerülhessük. A találmány szerinti eljárásnál előnyösen alkalmazott fehérjék a szarvasmarha vagy humán szérum albumin, vagy az immunoglobulinok, így például a monoklón antitest eljárással nyert immunoglobulinok. Ez utóbbi esetben a humán eredetű monoklón antitestek alkalmazása előnyös, mivel ezek bizonyos affinitást mutatnak a humán daganatokhoz. A konjugátumok előállításánál alkalmazott fehérjék módosított, így galaktozilált. fehérjék. E módosítás lehetővé teszi, hogy az új konjugátumok a felhasználásuk során bizonyos szövetekben, így például a májban koncentrálódjanak. Agalaktozilálást például G. Wilson eljárása szerint (J. of Biochemistry, 253, (7) 1978/, 2070-2072) végezhetjük. A találmány szerinti eljárással előállított konjugátumok in vitro vizsgálatai azt mutatják, hogy e vegyületek tumor-ellenes hatása sokkal nagyobb, mint a 3-as helyzetben kapcsolt konjugátumoké. A találmány oltalmi körébe tartozik az (I) általános képletű vegyülctckct hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárása is, amelyek előnyösen alkalmazhatók a humán gyógyászatban tumor-ellenes hatásuk alapján. Különösen előnyösen alkalmazhatók c hatóanyagok és készítmények leukémia, glioma, nyirokszövet-szarkóma vagy más rosszindulatú daganatok, így például az ún. „szilárd” daganatok kezelése re. A humán gyógyászatban előnyösen alkalmazhatók továbbá a Hodgkin-félc megbetegedések, valamint olyan daganatok kezelésére, amelyeknél a vinblasztin, vinkrisztin vagy vindezin felhasználható. A találmány szerinti eljárással előállított hatóanyagokat általában liofilizált formában alkalmazzuk, amelyeket parantcrálisan adagolunk gyógyászunkig elfogadható oldószerrel készült oldat formájában. Oldószerként előnyösen használhatunk például adott esetben pufferolt, így például fosz, fáttal pufferolt fiziológiás sóoldatokat. A hatóanyagokat általában 50 és több gramm közötti mennyiségben adagoljuk, adott esetben más ismert tumor-ellenes hatású készítménnyel együtt. A következő példákkal a találmány szerinti eljárást közelebbről mutatjuk be. I. példa a) Alfa- és béta-4-fí-dczacctil-4-0-L-N-acetil-liemiaszparlát-vinblaszlin 250 mg N-acetil-L-aszparaginsavanhidridct adagolunk 20 ml vízmentes diklór-mctánban oldott 700 mg (0,91 mmól) 4-0-dezacctil-vinblasztinhoz, majd a kapott reakciókcvcrékct 20 órán át szobahőmérsékleten keverjük, az oldószert vákuumban Icdcsztilláljuk és a visszamaradó anyagot kromatografáljuk (szilikagcl, ctcr/mctanol/25%-os ammónium-hidroxid, 60/49.75/0,25). A kapott terméket ezután diklór-mctán és petrol-étcr clcgycvcl elkeverjük, amikoris 650 mg 4-0-dczacctil-4-0-L-N-acctil-hcmiaszpartát-vinblasztint nyerünk fehér por formájában, kitermelés 77%. HPLC (nagynyomású retegkromatográfia) segítségével mindkét (alfa cs béta) izomer jelenléte kimutatható, arányuk 85/15. IR spektrum (KBr): 3420, 2960, 2880, 1737, 1660, 1613, 1501, 1460, 1430 cm-1. Tömegspektrum: DCl (izobután): 925 (M+), 939 (M * +14), 857,769,693. 635. h) Affa- és béta 4-0-deiacetil-4-0-L-N-acetil-liemiaszpartdl metil-észter-vinblasztin 500 mg (0,54 mmól) 4-0-dezacctil-4-0-L-N-acetil-hcmiaszpartát-vinblasztint 10 ml abszolút metanolban oldunk, száraz sósavgázzal telítjük cs szobahőmérsékleten 20 órán át keverjük. Ezután az oldószert vákuumban Icdcsztilláljuk, a maradékot 15 ml víz és 15 ml diklór-mctán clcgycbcn fclveszszük, ammónium-hidroxiddal meglúgosítjuk. a vizes fázist 3-szor diklór-inctánnal extraháljuk, a szerves fázisokat egyesítjük, 40 ml vízzel és 40 ml telített nátrium-klorid oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson betöményítjiik. A visszamaradó anyagot kromatográfiásan tisztítjuk (szilikagcl t mctilcnklorid/mctanol, 95/5). Ily módon 410 mg alfa és béta 4-0-dczacctil-4-0-L-N-acctil-hcmiaszpartátmctil-csztcr-vinblaszfint nyerünk, kitermelés 81%. A kromatografálás után nyert egyes izomerek analízis adatai: fő frakció: (a izomer): tömegspektrum (DCI, izobután): 939 (M+), 940 (M * +1), 953 (M1 +14) IR spektrum (KBr): 2950, 2880, 1740, 1675, 1615, 1503 cm-'. NMR spektrum (CDCI3, 360 MHz) ó: 9,65 (OH), 8.02 (NI I). 7,52 (H-9'),7,16-7.05 (H-10\ I lii', H— 12'). 6.61 (11—9), 6.52 (NH), 6,07. (H- 12), 5.75 (H— 14). 5.52 (H-17), 5,17 (H-15), 4,75 (-CII-NH), 3.95 (H-17A'), 3,80 (OMc), 3.77 (—OMc). 3.70 (-OMc), 3.60 (OMc). 2.80 (M—21 A', 1I-21B'), 2,67 (NMe), 2,62 (H—21), 2.00 (MeCO). 0,92-0,75 (2 Me) Rf: 0,51 (CHXU: CH3 = OH-90: 10, szilikagcl) Mellek frakció: r, 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
