196197. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mono- és bifunkciós antrakinon-(oxi-2,3-oxido-propán)-származékok és az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
7 190197 8 pitjuk, és a kezelt agarlemezeken lévő telepek számát százalékosan a kezeletlen kontrollcsoporthoz viszonyítjuk. Felvesszük a dózis-hatás görbéket, és a vegyületek hatásának jellemzésére megállapítjuk az ICso érté- 5 keket. Az adriamicinre vonatkoztatott eredményeket az 1. táblázatban foglaltuk össze. Az 1. táblázat adataiból kitűnik, hogy a találmány szerinti termékek - meglepő módon - in vitro körülmények között L 1210 leuké- io miaegérsejteken az adriamicin hatásával öszszemérhető vagy - a szerkezettől függően - gyakran annak hatását felülmúló tumorellenes hatással rendelkeznek. .4z akut toxicités meghatározása NMRI egereket a 0. napon a vizsgált vegyület különböző dózisainak 0,5%-os karboxi-metil-cellulózzal készített 0,5 ml-es szuszpenzióiból készített intraperitoniális injekciókkal kezelünk. A kontrollcsoportokat csupán 0,5 ml karboxi-metil-cellulóz oldattal kezeljük. A vizsgált vegyület minden egyes koncentrációjából 5 egeret kezelünk. A 14. napon megállapítjuk a túlélő egerek számát, és Litchfiled Víilcoxon módszer szerint az LDso értékeket meghatározzuk. A toxicitási adatokat az 1. táblázatban foglaltuk össze. 1. táblázat A vizsgált anyag Proliferációs vizsgálat ICsolug/ml) Sejttelep képződés vizsgálata ICsotjug/ml) Inlubáció: foly./l ó. Akut toxicités (mg/kg) LD50 Adriamicin 6 x IO-3 2 x IO-2 4.4 x IO-2 14 5. példa szerinti vegyület 4.4 x IO-3 1 x ÍO-2 8.3 X IO’3 200 4. példa szerinti vegyület 2.2 x IO’3 3.3 x IO-3 4 x IO'3 3. példa szerinti vegyület 2.8 x 10-2 3 x IO’2 6.6 x IO-2 8. példa szerinti vegyület 2.8 x 10-2 8.5 x IO-3 3 x IO-2 A találmányt az alábbi példákkal világítjuk meg közelebbről az oltalmi kör korlátozása nélkül. Kísérleti körülmények ismertetése Az olvadáspontokat Tottoli (Büchi) készüléken határoztuk meg, az értékek korrigálatlanok. IR-spektrum: kálium-bromid pasztilla; Perkin-Elmer 521 rácsos spektrofotométer, csak a karakterisztikus sávokat adjuk meg. UV-spektrum: metanol oldószer, Beckman DK 1A. spektrofotométer. tH-NMR-spektrum: CDCb (amennyiben nem tüntetünk fel külön más oldószert), tetrametil-szilán, mint belső standard, Varian A 60 vagy T 60 spektrométer. Tőmegspektrum: MS9 (AEI) spektrométer. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat: Kieselgél F254 (Merck) típusú lemezek. Eluálószer (amennyiben külön mást nem említünk) metilén-klorid - etil-acetát=4 : 1 összetételű oldószerelegy. Futtatási távolság: 15 cm; egyszeri előhívás. Amennyiben áz antrakinon-származék saját színe alapján a foltot azonosítani nem tudnánk, az előhívást UV fényben végezzük. Az oszlopkromatográfiás tisztításokat, amenynyiben külön mást nem említünk semleges al jminium-oxidon (Woelm), melynek aktivitása II. végezzük. Az epoxicsoport érzékenysége miatt mindig szigorúan savmentes metilén•10 -lloridot használunk. I. példa 45 An trakinon -2- toxi-2,3-oxido-propán) előállítása a) 10 g 2-hidroxi-antrakinon 100 ml epiklórhidrinnel készített oldatához vagy szusz- 50 penziójához vízelválasztóval ellátott lombikba visszafolyás közben (kb. 150 °C fürdöhőmérsékleten) 30 perc alatt 3 g nátrium-hidroxi 7 ml vízzel készített oldatát csepegtetjük keverés közben. Ezt követően további 8 órán 55 át erős keveréssel visszafolyatás közben forraljuk. A kivált nátrium-kloridot szűrjük, a szürletet kb. 100 ml savmentes metilén-kloriidal mossuk. Ezt követően a szűrletet enyhe vákuumban 1,06-1,3-104 Pa nyomáson az 60 oldószer és a felesleges epiklórhidrin eltávolítása céljából bepároljuk. A kapott maradékot metilén-kloridban feloldjuk és alumínium-cxid tartalmú oszlopon (amelynek magassága IC cm, átmérője 3 cm) átszűrjük, eluálószer- 66 ként kb. 500 ml metilén-kloridot használunk. 5
