196196. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új benztiazol-piperazin származékok és a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 196196 5 x ±S. E. = 1986 ± 208,5 se<c. Az eredményekből látható, hogy a találmány szerinti vegyületek az L-DOPA-val kiváltott hiperaktivitást szignifikásan növelik, b mint ilyenek, dopamin-hiányos állapotokban jelentős hatással rendelkeznek. b) Az l-metil-4-fenil-l,2,3,6-telrahidropiridin (MPTP) neurotoxikus hatásának gátlása. Az MPTP-ról 1979-ben írták le, hogy n dopaminerg rendszer neuronjainak degenerációját okozza emberen és majmokon [lásd: Davis, G. C. és munkatársai, Psychiat. Res. 1, 249-254, (1979); Burns R. S. és munkatársai, Proc. Nat. Acad. Sei. (USA) 80, 4546-4550 (1983)], majd a vegyület szelektív dopaminerg károsító hatását egereken is kimutatták, [pl. Hallman H. és munkatársai, Eur. J. Pharmacol. 97, 133-136, (1984); Pileblad E. és munkatársai, Neuropharmacol. 24, 689-694 (1985)]. Az MPTP-vel, kísérleti állatokon létrehozott Bzelektiv dopaminerg károsító hatás a humán dopaminerg rendszer degenerációs és hipofunkciós jellegű megbetegedésével analóg folyamatnak tekinthető és alkalmas modell olyan vegyületek vizsgálatára, melyek a terápiában a dopaminerg rendszer kóros működésével kapcsolatos betegségek kezelésére szolgálhatnak [Bradbury, A. J. és munkatársai, The Lancet 1444-45, (1985); Przun - tek, H. és munkatársai, Life Sei. 37, 1195- -1200 (1985)]. A vizsgálatokhoz 20-25 g-os, him, CFY egereket (LATI, Gödöllő) használtunk. A ve-, gyületeket 1%-os Tween 80 oldatban homogenizáltuk és 0,1 mmcl/kg-os dózisban a táblázatban megadott módon 1 órával az MPTP előtt adtuk az állatoknak. Az MPTP-t fiziológiás sóoldatban frissen feloldva 70 mg/kg-os dózisban szubkután adtuk az egereknek. Az állatokat az MPTP beadása után 72-96 óra múlva dekapitálással leöltük, az agyat gyorsan eltávolítottuk, jéghideg fiziológiás sóoldatban lehűtöttük és a striatumot kiboncoltuk, majd szárazjégen lefagyasztottuk. A szövetek súlyát (fagyott állapotban) lemértük, 1 ml 0,4 N jéghideg, 0,5% NajSiOs-t, 0,25% NaaEDTA-t és 100 ng N-metil-dopamint (belső standard a katechol-aminok meghatározásához) tartalmazó perklórsavban Ultra-Turrax készülékkel elhomogenizáltuk. A homogenizátumot 20 000 g-al centrifugáltuk 10 percig +4 °C-on, majd a felülúszóból 0,8 ml-t kivettünk. 20 mg aktivált AI2O3 hozzáadása után a pH-t 0,8 ml 0,5 M-os Tris oldattal 8-ra állítottuk és csöveket 20 percig rázattuk. Az alumínium-oxidot ülepítettük, a felülúszót leszívattuk, majd 3x5 ml desztillált vízzel mostuk. Az alumínium-oxidon adszorbeálódott katechol-aminokat 1 ml 0,05 N perklórsavval eluláltuk. Az eluátum egy részletéből dopomint határoztunk meg nagynyomású folyadékkromatográfiás módszerrel elektrokémiai detektálással: (Labor MIM OE-320 pumpa, 4>;150 mm-es NucleoBil 5 C-18 analitikai és 4x20 mm-es Nucleosil 5 C-18 előtét oszlop, glassy-carbon munkaelektróddal és Ag/AgCh referenciaelektróddal ellátott eletrokémiai detektor, Eltron potencioBztat, LKB 2110 kétcsatornás rekorder, oxidációs potenciál: 600 mV, mobil fázis 0,1 M NaHîPCL, 1 raM NaîEDTA, 1 mM oktánszulfonsav, mely 8,5% acetonitrilt tartalmaz, folyási sebesség 1 ml/ /perc). Az alkalmazott módszerrel a striatum dopamin szintjének 50-60%-os csökkenése érhető el. Az MPTP indukált dopamin depléció védését a következőképpen számítottuk: (vegyület + MPTP kezelt) - -(MPTP kezelt) gátlás % t ------------------------------------------------------ x 100 (kontroll)- (MPTP kezelt) Referenciaanyagként trihexyphenidyl- I hidrokloridot alkalmaztunk 10 mg/kg i. p. dózisban. Ez kevesebb, mint a 0,1 mmól/kg, de a 10 mg/kg-nál nagyobb dózisoktól az állatok elpusztultak. Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza. 2. táblázat Vegyület Dózis inól/kg Adás módja MPTP-vel indukált DA csökkenés gátlás% n E 0.1 p. 0. 100 7 F 0.1 i. p. 85 7 G 0.1 p. 0. 59 7 H 0.1 p. 0. 61 7 Trihexyphenidyl-HC1-i. p 7 7 Fentiekből látható, hogy a találmány szerinti I általános képletű új vegyületek orálisan és/vagy intraperitonealisan adva az állatoknak az MPTP-vel való kezelés előtt, nagymértékben vagy teljesen képesek kivédeni az MPTP neurotoxikus, dopamin-szint csökkenő hatását. A vegyületek kedvező, alacsony toxicitással rendelkeznek. Mindezek alapján a találmány szerinti új vegyületek értékes terápiás eszközt jelentenek mindazon kórképek befolyásolására, melyekben a dopaminerg rendszer degenrációja vagy más okok miatt, dopaminerg hipofunkció áll fenn. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
