196170. lajstromszámú szabadalom • Eljárás [(1,3-dioxo-1,3-propán-diil)-diimino]-bisz-benzoesav származékok és ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 2 196.170 Mint az a táblázatból látható, a vizsgált vegyületek LD5o értéke perorális adagolás esetén nagyobb 10000 mg/kg testtömeg értéknél, és egérnek intravénásán 5 adagolva nagyobb 200 mg/kg testtömeg értéknél. Ennek megfelelően ezeket a vegyületeket igen alacsony toxicitásűnak tekintjük. 10. Táblázat 9. Vizsgálati példa Passzív bőr-túlérzékenység elleni (PCA) hatás patkányban A vizsgálatot a 2. vizsgálati példában ismertetett módon végezzük, azzal az eltéréssel, hogy 12- és 14- szeres higítású antiszérumot alkalmazunk. Eredményeinket a 10. táblázatban ismertetjük. Vegyület Dózis Minták (mg/kg) száma Antíszérum hígítás: 12-szeres Antiszérum hígítás: 24-szeres Kontroll 10 0(%) 0(%) Tranilast 200 10 2,1 10,7 DSCG 100 10 0 0 11. 50 10 20,8 23,0 51. 10 10 28,1 30,3 50 10 34,2 37,5 14. 10 10 29,8 31,3 50 10 36,7 40,5 53. 50 10 26,1 23,9 54. 10 10 33,0 34,3 50 10 38,8 42,6 57. 10 10 37,0 30,9 50 10 45,0 50,1 59 10 10 22,0 25,1 50 10 65,7 62,0 56. 10 10 44,7 43,6 50 10 49,7 58,4 58. 10 10 40,2 43,1 50 10 50,8 57,6 Az eredményekből látható, hogy a találmány szerint előállított vegyületek anti-PCA aktivitása lényegesen erősebb, mint a Tranilasté és a DSCG-é, és aktivitásuk erősebb, mint all. vegyül été. 10. Vizsgálati példa Hisztaminnak patkány hasüregi hízósejtjeiből való felszabadulásának gátlása A hisztamin hízósejtekből való felszabadulásának gátlására kifejtett hatást antigén-antitest reakcióban vizsgáljuk. A DNP-Ascaris antiszérumot a 6. vizsgálati példában ismertetett módon állítjuk elő. A hízósejtek hasüregből és mellüregből való gyűjtésének és a sejtek szenzitizálásának módja Heparintartalmú PBS-t injektálunk patkány hasüregébe, majd az állatokat kivéreztetéssel leöljük. Ezután a hasukat alaposan megmasszírozzuk és a peritoneális folyadékot gyűjtjük. Azonos oldatot injektálunk a mellüregbe, a mellkast néhány percig rázzuk, majd a mellüreg folyadékából mintát veszünk. A folyadékot néhányszor centrifugálással mosva tisztítjuk. Megmérjük a folyadékban lévő hízósejtek számát és beállítjuk a kívánt, 8,0.104 sejt/ml koncentrációra. 4 ml 9.105 sejt/ml-es sejtszuszpenzióhoz 4 ml, gg 32 PC A titerű anti-DNP-Ascaris patkány szérumot adunk, majd az elegyet heparin jelenlétében 37 °C-on 2,5 órán át inkubáljuk. Az oldathoz ezután 0,5 ml 70 pg/ml-es foszfatidil-sZerin PBS oldatot adunk, és az elegyet 37 °C-on 12 percig inkubáljuk. Ezután 0,5 ml 140 pg/ml-es DNP-Ascaris PBS oldatot adunk az 55 elegyhez és további 20 percig inkubáljuk. A hisztamintartalom meghatározása A reagáltatás befejezése után a reakcióelegyet lecentrifugáljuk — a centrifugálást 10 percig, 500 g értéken végezzük — majd a felülúszóból a hisztamintartalmat fluorometriás eljárással ortoftálaldehi- 60 des módszerrel meghatározzuk. Eredményeinket a 11. 24
