196108. lajstromszámú szabadalom • 3-szubsztituált-4-hidroxi-kumarin-izomereket tartalmazó rodenticid kompozíciók
7 190108 8 A találmány szerinti készítményeket jó eredménnyel használhatjuk fel rágcsálók irtására, ugyanakkor azonban az elpusztítani nem kívánt állatfajták pusztulási veszélyét minimumra csökkenthetjük az ismert rodenticid kompozíciókhoz képest, így például a brodifakum .C" és .D’ izomerjét tartalmazó racém elegy felhasználásával készített, pasztillázott rodenticid készítménnyel fácánokat (Phasianus colchicus) etettünk, és azt tapasztaltuk, hogy a fácánok lényegesen nagyobb hányada élte túl a kísérletet, mint a hagyományos, mind a négy izomert körülbelül 1 : 1 : 1 : 1 arányban tartalmazó készítménnyel etetett állatok. Ez az eredmény azt igazolja, hogy a találmány szerinti készítmények az ismerteknél lényegesen nagyobb biztonsággal alkalmazhatók. Egy másik kisérletsorozatban macskákat vizsgáltunk. A macskákat olyan táplálékkal etettük, amely a rodenticid hatóanyaggal mérgezett állatok tetemének elfogyasztását szimulálja. A brodifakum .C és .D' izomerjével kezelt állatcsoportban nem észleltünk pusztulást. Az egyetlen érzékelhető változás az voit, hogy az állatok véralvadási ideje időnként megnövekedett, azonban rövid időn belül visszaállt a normális értékre. Ezzel szemben a brodifakum mind a négy izomerjével egyébként azonos dózisban kezelt állatcsoportban az állatok véralvadási ideje tartósan megnövekedett, nem tért vissza a normális értékre, ami 100%-os pusztuláshoz vezetett. Ezek a vizsgálati eredmények, valamint a rágcsálók és az elpusztítani nem kívánt állatok tetemeiben mért cisz/transz izomer-hányadok azt igazolják, hogy az elpusztítani nem kívánt állatok szervezetéből - feltehetőleg szelektiv metabolizmus révén - gyorsan kiürül a brodifakum .C" és ,D" izomerje, ezzel szemben az ,A‘ és ,B" izomer nem ürül ki a halálos következmények elkerülését lehetővé tevő sebességgel. Ilyen szelektiv kiürülést tapasztaltunk különféle dögevő és ragadozó állatoknál, például rókáknál, macskáknál, baglyoknál, héjáknál és keselyűknél. Így ha ezek az elpusztítani nem kívánt állatok a találmány szerinti i'odenticid készítményekkel megölt rágcsálók tetemeit fogyasztják, a rágcsálók tetemeiből felvett maradék hatóanyag gyorsan eltávozik az állatok szervezetéből és a hatóanyag további mérgezett rágcsáló-tetemek elfogyasztásakor sem halmozódik fel az állatok szervezetében toxikus mennyiségben. Egyes esetekben bizonyos hatóanyag-izomerek a rágcsálók szervezetéből is szelektíven kiürülhetnek. Annak ellenére azonban, hogy ilyen- jelenséget észleltünk, megállapítható, hogy a rágcsálók nem képesek az egyszer már elfogyasztott rodenticid hatóanyag halált okozó hatását kivédeni. így a találmány szerinti kompozíciók hatásosan irtják a rágcsálókat annak ellenére, hogy a hatóanyag egy bizonyos hányada kiürülhet a rágcsálók szervezetéből. Ez azzal a további előnnyel is jár, hogy a tcvikvs szermaradékok mennyisége a rágcsálók szöveteiben már csökkent, Így a rágcsálók tetemét elfogyasztó emlősök vagy madarak szervezetébe eleve kisebb mennyiségű rodenticid hatóanyag kerül. A találmány szerinti kompozíciók hatóanyagait a cickányok és pockok képesek bizonyos mértékig kiüríteni szervezetükből. Noha a 3-szubsztituált-4-hidroxi-kumarin-származékok egyes izomerjeinek szelektiv kiürülési mechanizmusa még nem tisztázott, az nyilvánvaló, hogy az eltérő izomerek kíürülési sebességei között adódó eltérések összefüggésben vannak az izomerek és a metabolizáló enzimek egymáshoz viszonyított konfigurációjával. Az élő szervezetben lévő metabolizáló enzimek aktiv helyeinek konfigurációja ugyanis adott, következésképpen az enzimek egyes izomereket lényegesen gyorsabban bontanak le, mint más - az előzőektől eltérő konfigurációjú - izomereket. Kémiailag nagy mértékben hasonló szerkezetű vegyületek csoportján belül várható, hogy az azonos konfigurációjú izomerek azonosan vesznek részt a metabolizmus-folyamatokban. A találmány szerinti készítmények ennek megfelelően hatóanyagokként az egynél több stabil izomer formájában létező, rodenticid hatású 3-szubsztituáit-4-hidroxi-kumarin-vegyületek olyan izomer jeit tartalmazhatják, amelyek konformációja megegyezik a korábbiakban részletesen ismertetett, előnyös rodentic d hatóanyag-izomerekével. A találmányt az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük. 1. példa Technikai minőségű brodifakumból, amely abszorpciós nagynyomású folyadékkromatográfiás elemzés alapján 99,3%-os tisztaságú és 58,3 t% cisz-izomert és 41,0 t% transz-izomert tartalmaz, preparativ nagynyomású folyadékkromatográfiás úton elkülönítjük a cisz- és transz-izomereket. A kromatográfiához Waters Associates System 500 típusú készüléket használunk. Abszorbensként prep-PAK-500 típusú, szilikagéliel (80 m) töltött oszlopot, mozgó fázisként pedig 70 : 30 : 0,4 térfogatarányú petroléter (fp.: 40-60 °C) - dietil-éter - jégecet elegyet alkalmazunk. Az egyedi frakciókból elkülönítjük az izomereket, majd az elkülönített izomereket preparativ nagynyomású folyadékkromatográfiás úton tovább tisztítjuk. A tisztításhoz mozgó fázisként a fenti oldószer-elegyet használjuk fel. Az utóbbi műveletben elkülönített két termékfrakció - 100 MHz frekvencián felvett NMR-spektrum alapján - tiszta, a másik izomertől lényegében mentes cisz-, illetve transz-brodifakum. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
