195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
19 195979 20 din-keveréket (a micélium extrahálésával nyert) metanol és viz 1:1 arányú elegyének 500 ml-jében feloldunk, és az oldatot 500- -500 ml toluollal ötször extrahéljuk. Az egyesített toluolos fázisokat vákuumban bepároljuk, a maradék: 32 g citorodin-keverék, amely főleg kevésbé poláros komponensekből áll {az ún. I. komplex főleg F, D, C, P, X és V citorodint tartalmaz). A vizes-metanolos fázistól 47 g olyan citorodin-keveréket izoláltunk (II. komplex), amely inkább poláros komponensekből áll (főleg B-, H-, A-, M-citorodin és az Y-frakció, amely egyebek között az M-, S—, (N+O)- és W-citorodint tartalmazza. Az igy kapott termékek kedvező kiindulási anyagok a citorodinok további tisztítása szempontjából, feldolgozhatjuk oszlopkromatográfiás módszerrel vagy DCC-kromatográfiásan (droplet counter current chromatography) vagy a két módszer kombinálásával. 11. példa Az A-citorodin és a (N+0)-citorodin feldúsitása módosított Kieselgélen végzett oszlopkromatográfia útján A 10. példa szerint előállított, nyers poláros citorodin-elegy (II. komplex) 10 g-ját kloroform, víz és metanol 130:40:40 arányú elegy (alsó fázis) 30 ml-jében feloldunk. Az oldatot 5,5x95 cm, méretű, mintegy 870 g módosított Kieselgél 31 ju (Grace) adszorbenssel töltött üvegoszlopra visszük. A fenti oldószereleggyel eluálunk. A Kieselgél előkészítése: a Kieselgélt 2n sósav-oldattal fémmentessé mossuk, a savat kimossuk és a Kieselgél vizes szuszpenzióját 5n nátrium-hidroxid-oldattal kezeljük 7,6 pH beálltáig. Dekantálás után a módosított Kieselgélt szárítószekrényben 130 °C-on szárítjuk, szitáljuk, majd a mozgó fázissal beiszapoljuk az oszlopba. A kromatografélást mintegy 100 ml/óra átfolyási sebesség mellett először 5,5 liter fent említett oldószereleggyel utána kloroform, víz és metanol 130:40:50 arányú elegyének 5,3 literjével végezzük, mintegy 15 ml-es frakciókat felfogva. Vékonyrétegkromatográfiai elbírálás alapján a frakciókat az alábbiak szerint csoportosítottuk (2 literes elöfrakció elfolyatva): frakció I g vegyületek 1-52 0.750 0.63 nem poláros vegyületek (egyebek között C és D) elegye 53-343 4.1 2.64 közepesen poláros vegyületek [V, (G+I) és B] elegye 344-400 0.9 1.7 erősebben poláros vegyületek (B és A) elegye 401-4 30 0.3 0.56 kb. 40% A, kb. 35% (N+0) 431-5-30 1.1 1.3 erősen poláros vegyületek [egyebek között A, (N+0), W] elegye Egy liter metanollal a poláros és erős poláros komponensek elegyét mossuk az oszlopról. 12. példa Feldúsított poláros citorodin-elegy frakcionálása cseppellenáramos kromatográfiával (DCCC módszerrel) A toluol és metanol közötti elosztás során nyert, erősebben poláris komponensekben dús citorodin-elegyből 5 g-ot a DCCC módszerrel, DCC-Chromatograph 670 (Büchi) típusú készüléket használva frakcionálunk. A mintát a kloroform, víz metanol és n-propanol 45:90:120:5 arányú elegyéből álló, kiegyenlítés után 1% 96%-os ecetsavval adagolt heterogén oldószerelegy alsó fázisának 20 ml-jében feloldjuk és beszivattyúzzuk. Mintegy 40 ml/óra átfolyási sebesség és 5-10 bar nyomás mellett, 200 ml elöfrakció után 3 nap alatt mintegy 3 liter alsó fázist szivatytyúzunk az álló fázissal (azzal a fenti elegy 1% 96%-os ecetsavval kiegészített felső fázisával) töltött üvegcsöveken át (ID, 2,7 mm, .descending mode'). A kilépő mozgó fázist 10-10 ml-es frakciókban felfogjuk. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat után a frakciókat az alábbiak szerint csoportosítjuk: frakció mg komponensek elöfrakció 800 (olajos) alig konvertált kiindulási elegy, nempoláros részek 1-21 660 V. L és B elegye 22-27 450 B, összekeverve kisebb mennyiségű poláros (V. L) komponenssel 28-33 500 B (kevésbé poláros szennyeződésekkel 34-55 230 A, M és L 56-63 200 A, M 64-75 420 A, M, erősebben poláros kompo-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
