195979. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
21 195979 22 nensekkel 76-100 1300 Y-frakció (N+O és W-komponenssel) 13. példa. Az A és (N+O) citorodin elkülönítése erősen feldúsított elegyböl, fordított fázisú nagynyomású folyadékkromatogréfia (reversed phase HPLC) segítségével. Mintegy 40% A-citorodint és mintegy 35% (N+0)-citorodínt tartalmazó keverékfrakció 50 mg-ját a mozgó fázis kloroform, metanol és 10%-os vizes ammónium-acetát-oldat 150: :1050:375 arányú elegye) 1,5 ml-jében feloldunk és 1,6x25 cm méretű acéloszlopon 30 g Lichrosorb RP-18, 10 p (Merck) adszorbensen 2 ml/perc áramlási sebesség mellett kromatografálunk. Átáramlási fotométer segítségével 490 nm hullámhossz mellett követjük az eluálást. A 4 ml-es frakciókat analitikai nagynyomású folyadékkromatogréfia (szintén acéloszlopban, azonos adszorbenssel végezve) alapján egyesitjük és feldolgozzuk. Az összesített frakciókat fele annyi vízzel hígítjuk, kloroformot adunk hozzá a fázisok szétválásáig, majd az elválasztott kloroformos fázist vízzel mossuk, nátrium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. frakció C-rendszerben mért Re-érték 15-17 kb. 5 mg dúsított M-citorodin 26-30 22.5 mg (N+O) citorodin 0.30 35-40 10.4 mg A-citorodin 0.41 C-rendszer: kloroform, metanol, 99%sav és viz 75:15:10:2 arányú elegye-os ecet(N+0)-citorodin Ml-NMR-színkép: 9. ábra abszorpciós színkép: a) 235 (4.56) 25 (váll) 293 (3.67) 495 (4.04) b) 234 (4.59) 25 (váll) 293 (3.68) 495 (4.15) c) 240 (4.51) 283 (3.81) 575 (4.0) 615 (3.98) C60HSSN2O21, számított moltömeg: 1172 (FAB-Ma által igazolt) Az elkülönített elegy a szerkezetileg izomer N- és O-komponensek 1:1 arányú keveréke. Ezt a tényt a NMR-színkép, lebontási kísérletek (hidrogenolizis), valamint a cukrok hidrogenolizis és teljes hidrolízis után végzett meghatározása igazolja. Az O-citorodin 12 az irodalomból ismert [H. Brockmann, H. Greve, Tetrahedron Letters 1975 (831-834)]. 14. példa A P-citorodin elkülönítése közepes nyomású kromatográfia és preparatív vékonyrétegkromatográfia segítségével Az I. tábla szerinti eljárással tenyészléből nyert nyers citorodin-elegy 6 g-ját 620 g Kieselgél 31 ju (Grace) adszorbensen radiális irányban nyomás alatt helyezett két darab Silica-patronban (Waters, PrepLC/System 500) kloroform, metanol, 96%-os esetsav és viz 80:10:10:1 arányú elegyével kromatografáljuk. A mintát a futtató elegy 50 ml-jében feladjuk a kiegyensúlyozott oszlopra és 35 ml/perc átfolyási sebesség mellett 23 mles frakciókra bontjuk. A frakciókat vékonyrétegkromatográfiailag, valamint az analitikai HPLC segítségével minősítjük. A 41-56. frakcióban 220 mg P-citorodint találjuk; tisztasága: 88%, A-rendszerben mért Rr. 0,42. A termék 40 mg-jót preparatív vékonyrétegkromatográfia (Merck, DC-Kieselgél lemez) segítségével az A-rendszer szerinti oldószereleggyel tovább tisztítjuk. A Kieselgél sávot kloroform és metanol 1:1 arányú elegyével eluáljuk. Az eluátumot vizes dinétrium-hidrogén-foszfátoldattal semlegesítjük és vízzel hígítjuk a fázisok szétválásáig. A kloroformos fázist elválasztjuk, kevés vízzel kloroformban oldjuk és tízszeres térfogatú petroléterrel kicsapjuk. A szárított csapadék: 15 mg tiszta P-citorodin. P-citorodin 'H-NMR-szinkép: 10. ábra abszorpciós színkép (nm) a) 235 (4.63) 494 (4.13) 254 (váll, 4.33) 293 (3.90) b) 235 (4.60) 494 (4.12) 254 (váll, 4.31) 293 (3.85) O 244 (4.33)-570 (3.59) 620 (3.71) C60H82N2O21, számított moltömeg 1166 (FABMS által igazolt) 15. példa A V-komponens elkülönítése nyomáskromatográfia és preparatív vékonyrétegkromatográfia segítségével Az I. tábla szerinti eljárással tenyészléböl nyers citorodin-elegy 7 g-ját 620 g Kieselgél 31 ju (Grace) adszorbensen radiális irányban nyomás alatt helyezett 2 darab Sili-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 G5
