195855. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tumorellenes hatású LL-E33288 jelű antibiotikum-komplex és komponensei előállítására
16 195855 17 reltük az LL-E33288 antibiotikum-komplexszel szemben reziszlens izolátumok kinyerését. Az UV 610(3) izolátum vegetativ tenyészetét készítjük el és alkalmazzuk a fermentációhoz; ezzel a tenyészettel lombikban levő és pentonból, dextrózból, melaszból és vízből álló táptalajt oltunk be. A táptalajhoz 8 pg/ ml koncentrációban LL-E33288ßi-Br-t adunk. Ebből a lombikból több lemezt öntünk és a 7. napon rezisztens populációt nyerünk. Összesen 97 telepet izolálunk (RL-R97). Az R66 sz, izolátumot választjuk potenciálisan javított LL-E33288ßi-Br termelő törzsnek. A mutáns származásának történetét az alábbi sematikus ábrán mutatjuk be.: E33288 (vad típus) NS6 (természetes szelekció) — NTG (NG1-NG120) (nitrózó-guanidin) — UV (UV-UV200) (UV) — UV (UV201-UV400 (UV) — UV (UV401-UV702) (UV) UV610 (+) (al-izolátum 3) (R1-R97) (rezisztens telepek) I R66 W) Táblázat NRRL 15839 és NRRL 15975 törzs morfológiai összehasonlítása Agár táptalaj NRRL 15839 NRRL 15975 Bennet-féle V1 drapp-oserszínű drapp-cser színű dextrin Sp fekete, bőséges nincs SS nincs nincs Czapek V narancs-cserszínű narancs-cserszínű Sp fekete, nyomok nincs SS nincs nincs Élesztő extrakt V narancs-cserszinű, narancs-cserszínű, csavart Czapek Sp lapos, fekete, nyomok nincs SS nincs enyhén sárgás Burgonya-V nagyon gyenge növek nagyon gyenge növek. dextróz Sp nincs nincs SS nincs nincs Táptalaj-V cserszinű cserszínű glicerin Sp fekete, ritkás fekete SS nincs nincs Táptalaj V cserszínű cserszínű Sp fekete, szép nincs SS nincs nincs Az R66 mutánst a Medical Research Division, American Cyanamid Company Pearl River, New York törzstenyészetében tartjuk fenn. A mikroorganizmus életképes tenyésze- 5 tét a Culture Collection Laboratory, Northern Regional Research Center, US. Department os Agriculture Peoria Illionis intézménynél 1985. június 6-án NRRL 15 975 szómon deponáltuk. Az NRRL-15975 mutáns morfológiailag ]0 kevesebb spórát képez, mint az NRRL-15839 törzs. A két törzset a DD táblázatban hasonlítjuk össze. Kémiailag az NRRL-15839 és NRRL-15975 törzs azonos teljes-sejtcukor-képet mutat (D-típus: xilóz és nyomnyi arabi- 15 nóz). A teljes sejt diamino-pimelinsav analízise azt mutatja, hogy az NRRL-15975 törzs mezo-izomert nem képez, csupán a 3-hidroxi-származékot (az NRRL-15839 törzs mindkét vegyülete tartalmazza). Ez azoban a kémiai- 20 -taxonómiai besorolást nem változtatja meg. Fiziológiai tesztek szerint az NRRL-15839 és NRRL-15975 törzs csupán két fiziológiai reakcióban különbözik egymástól (lásd D táblázat). Az NRRL-15975 törzs nitrát-reduktázra 25 negatív míg laktót-hasznosítása pozitív. Az NRRL-15839 törzs mindkét fenti tesztben gyengén pozitív, azonban többhónapos ferde agar tenyészete már negativ. így a fenti jellemzők a taxonómiai egységen belül változó- 30 nak tekintendők. 1 r V z vegetatív hifa-fonalak; Sp = spórák; SS = oldható, pigment. Megjegyezzük, hogy találmányunkat nem korlátozzuk az új baktérium- és lumorellenes szereknek a megnevezett mikroorganizmusokkal vagy a fenti, csupán bemutató és ismertető jelleggel közölt növekedési és mikroszkopikus jellemzőknek teljesen megfelelő mik- 60 roorganizmusokkal való előállítására. Találmányunk a fenti mikroorganizmusokból különböző módszerekkel, pl. röntgenbesugárzással, UV-besugárzással, JV-metil-W-nitro-N-nitrózó-guanidinnel vagy aktinofágokkal való 65 kezeléssel stb. - készített mutánsok felhasz10
