195855. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tumorellenes hatású LL-E33288 jelű antibiotikum-komplex és komponensei előállítására
31 195855 35 GF előre bevont lemezek, Analtec.h) tovább tisztítunk; az előhívást 0.1 mólos vizes kálium-dihirogén-foszfáttal telített., 2% izopropilalkoholt tartalmazó etil-acetáttal végezzük el. A rövidhullám hosszú (254 nin) UV-láinpa alatt fő kioltást. mutató sávot (kroniatográfiálisan Rr - 0,5) kivágjuk és feldolgozuk. Kb. 4,3 mg gyakorlatilag tiszta 1,1,-E33288"j i-Br-t kapunk. Az LL-E33288 bróm-komplex termeléséhez előnyösen az alábbi összetételű fermentációs tápközeget alkalmazhatunk: Komponens % szaccharóz 2.0 vas(II) szulfát-hepta-hidrát 0.01 magnézium-szulfát-hepta-hidrát 0.02 kalcium-kar honát 0.5 pepton 0.2 Komponens -A' Szaccharóz vas (II )szulfát-hep tahid i át magnézium-szulfát-heptahidrát kalcium-karbonát'' pepton" melasz kálium-jodid viz qs x = Mississippi anyag xx= legjobb eredményeket MARC0RR bakteriológiai peptonnal kapjuk, azonban más peptonokat is alkalmazhatunk, továbbá hús- és kazeinhidrolizátumból nyert polipeptideket. 7. példa Micélium-spóra szuszpenziót készítünk oly módon, hogy NRRL-15839 ferde tenyészetének felszínét lekaparjuk és 5 ml steril desztillált vizet adunk hozzá. A szuszpenzióval 500 ml-es lombikban levő alábbi összetételű steril beoltó tápközeget inokulálunk: éleszt.őextrakt 0.5% marhahúsextrakt 0.3% triptóz 0.5% keményítő 2.4 dextróz 0.5% kalcium-karbonát 0.4% viz qs 100%—ra' A beoltó lombikot 28 “C-on forgó ráza- Lógépen percenkénti 200 fordulat melleit 3-4 napon át inkubáljuk. Az „I. fokozatú” inokulumot kapjuk. Az „I. fokozatú” inokulumol használjuk fel az azonos összetételű, a fenti körülmények között 2 napon át inkubált steril közeg - a „II, fokozatú" inokulum - inokulálására. melasz 0.5 nútrium-bromid 0.05 viz 100-ra A fermentációs tápközeghez (pl. káliumr, -jodidot) adva az alábbi előnyök biztosíthatók: 1) A fermentáció során jelentősen nagyobb vegetatív növekedés. 2) Escherichia coli H 300 és Bacillus subtilis H 308 törzsekkel szemben a biokisérteli vizsgálat szerint nagyobb gátlási zóna. 3) TLC lemezek bioautográfiája során az l,h-E33288ű í-J és -ji-J antibiotikumoknak 15 megfelelő Rr helyeken jelentős aktivitás. 4) TLC meghatározás szerint más komponensek termelésének növelésére. Az LL-E33288 jód-komplex termelésénél előnyösen az alábbi két tápközeget alkalmaz-20 h; ltjuk: közeg 1 :%) .B'közeg (%) 2.0 2.0 0.01 0.01 0.02 0.02 0.5 0.25 0.2 0.2 0.5 0.5 0.05 0.01 00- ra 100-ra A „II. fokozatú” inokulummal ezúton 100 ml, alábbi összetételű steril fermentációs tápközeget inokulálunk: szaccharóz vas (II) szulfát-hep ta2.0% hidról magnézium-szulfát-hepta-0.01% 40 hidr. 0.02% kalcium-kar bonét 0.5% pepton (MARCORR) 0.2% melasz 0.5% kalcium-jodid 0.05% 45 víz qs 100.00%-ig A fenti tápközeget 28 °C-on rázóge percenkénti 200 fordulat mellett 5 napon át ir kubaijuk majd a fermentlevet feldolgozzuk. 4-20 /ug/ml kálium-jodid koncentráció az 50 optimális, azonban a kitermelés 2 mg/ml koncentrációig nem csökken. Az NRRL-15839 fermentációval is termelhető LL-E33288/) i-J, ha a tápközeghez káli — um-jodidot adunk, azonban csak nagyon kis 55 mennyiségben (0,2-0,3 jug/ml) szemben a jobban termelő NRRL-15975 törzs esetében alkamazoll 1,5-3,5 ug/m) értékkel. A^i-J és -ji-J hozama jódozott tápközegben 2-8-szor nagyobb, mint a megfelelő 50 0,-ßr és "ji-Br bróm-vegyülete hozama brómtartalmú tápközegben, az NRRL-15975 törzs felhasználása esetén. 19
