195839. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-21978 C jelzésű ciklusos peptid származékok előállítására
23 193839 24 Alkotórészek Mennyiség Klőfőzöll zabliszt 20.0 g Szacharóz 20.0 g íl('HZt') 2.5 g Száritoll szeszgyári gabonut.örköly* 5.0 g KjIU’Oí 1.0 g Czapok-féle ásványi lörzsoldat 5.0 ml ioniuenlosílclt víz ] literig. A pll-l. riálrium-liidroxiddal 7,4-re állítjuk be; autókká vozns után a pH körülbelül G,8. 'National Distillers Products Co,, 99 Park Avo., New York, N.Y. A boot toll vegetatív táptalajt 250 ml-es bőnyakú lirlenmoyer-lombikban 30 °C-on mintegy 72 óráig inkubáljuk, 5 cm átmérőjű ív körül percenként 250 forgást végző rszógépen. A fenti inkubált vegetatív táptalajjal közvetlenül beoltunk egy második fokozatéi vegetatív táptalajt. Előnyösen fölrolesszAik későbbi felhasználáshoz, a tenyészetet folyékony nitrogén gőzfázisában tartva. Ilyen tároláshoz a tenyészetet több kis fiolában állítjuk elő a következőképpen: mindegyik fiolába bemérünk 2 ml inkubált vegetatív táptalajt én 2 ml glicorin/laktóz oldatot (W.A.Dailey és C.E. Higgins, ..Presorution and Storage of Microorganisms in the Gas Phase of Liquid Nitrogen,,, Cryobiol. 10, 364-3G7 /1973/). Az előállított szuszponziókat a folyékony nitrogén gőzfázinában tároljuk. Az így elkészítőit tárolt szuszponziót (1 ml) használjuk 50 ml első fokozatú vegetatív táptalaj beoltására (melynek összetételéi fentebb megadtuk). A boollull első fokozatú vegetatív táptalajt a fentiek szerint inka báljuk. Nagyobb térfogatú inokulum előállítása céljából az inkubált olső fokozatú vegetatív táptalaj 10 ml-óvel beoltunk 400 írd második fokozatú vegetatív táptalajt, melynek összetétele azonos az első fokozatúéval. A második (■okozaté táptalajt 2 literes bőnyakú Brlenmeyei—lombik ban 30 °C-on 48 óráig inkubáljuk 5 cm átmérőjű iv körül percenként 250 forgást végző rázógépen. A fentebb leírtak szerint előállított, jnkubáll második fokozatéi vegetatív táptalajjal (80 ml) beoltunk 10 liter steril szaporító táptalajt, melynek összetétele az alábbiak egyike: Alkotórészek 1. táptalaj Mennyiség (gramm per 1) Földimogyoró liszt Oldható hús-papion Szacharóz KIIjPOi KailPO, 10.0 5.0 20.0 0.5 1.2 10 15 20 30 35 40 45 G0 C5 Alkotórészek Mennyiség (gramm per 1) MgS0i.7lii0 0.25 Csupviz l literig. 121 "1-on 45 porcig mintegy 110-124 kPa nyomás alatt végzett autoklávozás után a táptalaj pil-jn körülbelül (>,9. 11. táptalaj Alkotórészek Mennyiség (g per 1) Szacharóz 30.0 Pepton 5.0 K2IIPO« 1.0 KC1 0.5 MgSOí.71bO 0.5 l'’eS0«.71l2O 0.002 . lonmentesítolt viz 1 literig. A pll-t IICl-val 7.0-re állítjuk be", autóklávozás után a pH körülbelül 7,0. ILI. táptalaj Alkotrészck Mennyiség (g pej- 1) Glükóz 20.0 N1UC1 3.0 NarSO, 2.0 ZnCh 0.019 MgCb.GIliO 0.304 FeCb.GlJiO 0.062 MnCl2.4II20 0.35 CUCI2.2H2O 0.005 CaC03 G.O KHjPO«' 0.G7 Csapvtz 1 literig. * Külör. sterilizálva és fertőző anyaguktól mentesen hozzáadva. Vógső pH körülbelül G,G. A beoltott szaporító táptalaj fermentációját 14 I-es fermontorban mintegy 30 °C-on körülbelül 56 óráig folytatjuk. A fermentációs közeget szokásos keverékkel körülbelül G00 ford/perc sebességgel keverjük és sLcril levegővel levegőztetjük úgy, hogy az oldott oxigén szintjét 30%-os lcvegőtelítés felett tartsuk légköri nyomáson. 11. Az A-21978C dezaedezés Az A. uíahunsis fermentációját az A. fejezetbori leírlak szerint hajijuk végre ferde A. táptalajt ér- I. szaporító táptalajt használva ós n szapoiító táptalajt mintegy G7 óráig inkubálva. A fermentációs közeghez nyers A-21978C komploxol adunk (100 g). Az A-21978C komplex dezucilezósél Micrococcus iulous-szal végzett próba segítségével követjük. A fcrmeiitácit teljes dczaciioződósig folyta'juk; czL a M. luLeos-sál szembeni aktivitás oitünáse jelzi (körülbelül 24 óra). 13
