195734. lajstromszámú szabadalom • Eljárás herpes simplex vírus elleni védőanyagok előállítására
11 195734 12 Hat. A találmány továbbá olyan vakcinákészitményekre is vonatkozik, amelyek a gD-2 hatásos mennyisége mellett immunológiai szempontból elfogadható higitószcrt, segédanyagot vagy vivöanyagot tartalmaznak; leirjuk továbbá azokat a vukcinálási eljárásokat, amelyek abban állnak, hogy az említett vakcinakészítményiíket állatoknak - beleértve az embereket is - adagoljuk azzal a céllal, bogy mind HSV-1, mind IISV-2 fertőzések okozta megbetegedésekkel szemben védóbatásl biztosító, immunológiai válaszokat váltsunk ki. Találmányunk tehát egyik vonatkozásában jelentős javulást eredményez a technika jelenlegi állása szerint ismert vakcinálási eljárásokkal szemben, amelyek során HSV részecskék egy vagy több komponenst tartalmazó frakciót adagolják azzal a céllal, hogy a befogadó állatban immunológiai védöválaszt váltsanak ki HSV fertőzés által előidézett megbetegedésekkel szemben. A találmány olyan tömegű gD-2 antigént biztosit (elfogadható oldószerre] képzett oldatban, segédanyagokkal és vivöanyagokkal együtt), amely elegendő ahhoz, hogy HSV-1- vagy HSV-2-vel szemben védelmet biztosító választ váltson ki; e válasz abban áll, hogy a gazdaszervezetben a gD-2-nek megfelelő antitestek képződnek. Találmányunk továbbá első ízben ismertet a HSV-1 burkából származó gD-1 glikoproteidet tartalmazó, immunológiailag aktív készítményt, amely a technika jelenlegi állása szerint ismert készítményektől abban különbözik, hogy elkülönítése monoklón, gD-elleni antitestet tartalmazó imnumadszorbenshez való szelektív, reverzibilis kötéssel történik. Ezt a glikoprotein-készitményt jellemzi többek között, hogy immunológiai sajátságai felülmúlják a technika jelenlegi állása szerint elérhető, legmagasabb mértékben tisztított gD-1 glikoprotein-készitmények sajátságait; a találmány szerinti gD-1 készítmény hasonló a fentebb említett gD-2 készítményhez, amenynyiben mentes más, a HSV burkában lévő glikoproteinektöl és a vírusból vagy sejtből származó DNS-től. A találmány szerint gD-1 előnyös forrása HSV-1 vírussal fertőzött sejtek citoplazniakivonata. A találmány továbbá olyan vakoinakészitményekre is vonatkozik, amelyek ugyanolyan erős védóhatással rendelkeznek, mint amelyet fentebb a találmány szerint gD-2-vel kapcsolatban leírtunk. A találmánynak egy további szempontja, hogy jelentős javulást eredményez a HSV fertőzés okozta megbetegedések ellen védő immunológiai válaszok kiváltására a technika jelenlegi állása szerint ismert módszerekkel szemben. Hasonló a találmány szerinti gD-2 készítményhez, a találmány újszerű antigén gD-1 anyagot ir le, amelynek figyelemre méltó immunológiai jelentősége van. A találmány szerinti vakcinakészitméiiyek - a fenti jellemzés szerint - akár a találmány szerinti gD-2-t vagy gD-l-et vagy mindkettőt tartalmazhatják, és előnyösen olyan mennyiségekben adagoljuk, amelyet a befogadó állat, testsúlyának egy kilogrammjára számítva 0,01 - 10,0 mikiogramm immunológiailag aktiv glikoproteidet tartalmazó adagolási egységekkel valósítunk meg, A teljes védöadag az antigén 0,1 mikrogrammjától körülbelül 100 mikrogramm mennyiségig terjedhet. A vakcina-készítmények - a gD-1 és/vagy gD-2 anyagon kívül - immunológiai szempontból elfogadható hígító,— és vivőanyagokat, valamint általánosan használt segédanyagokat is tartalmazhatnak. Ilyenek például: Freun-féle teljes adjuváns, szaponin, Limsó és ezekhez hasonló anyagok. A találmány szerinti gD-1 és gD-2 készítmények kinyerésének céljára előnyös, monoklón gD-elleni antitest egy tisztított IgG frakció, amely ascites-folyadékból származik. Ezt az ascites-folyadékot egy monoklón, HD-1 antitest képző hybridoma nemzedék hozza létre [Periera és munkatársai: J. Virol. 29, 724 (1980)). Számos más, monoklón, gD elleni antitest, készítmény is kedvező eredményekkel alkalmazható a találmány szerinti gD-1 és gD-2 tisztítását célzó immunadszorbens elkészítésére. A találmányunk kiterjed továbbá olyan új, diagnosztikai reagensekre is, amelyek gD-1 vagy gD-2-t (vagy ezek aktív fragmentumait vagy replikáit) immunológiailag íiktiv vivöanyagokkal vagy jelzőanyagokkal együttesen tartalmazzák. Találmányunk, egy másik vonatkozásában, immunológiailag aktív HSV glikoproteid D-fragmentum replikákat ir le, amelyek célszerűen alkalmazhatók immunreaktiv anyagokként, amint azt virusforrásokból származó glikoproteidek alkalmazására leírjuk. Közelebbről, a találmány olyan polipetideket ir le, amelyek aminosavszekvenciái a gD-l-ben és/vagy gD-2-ben fennálló aminosavszekvenciákat teljesen vagy részben lemásolják (duplikálják). A találmány szerinti polipeptidek előnyösen a következő szekvenciát tartalmazzák: RNH-Met-Ala-Asp-Pro-Asn-Arg-COR’ ahol R jelentése hidrogén vagy egy vagy több aminosav és R’ jelentése hidroxilcsoport vagy egy vagy több aminosav. R és R’ jelentésében az aminosavak részben vagy egészében a gD-1 és gD-2 proteinek aminosav- szekvenciájának felelnek meg. így pédául a kémiai úton szintetizált Nlte-Ser-Leu-Lys-'Met-Ala-Asp-Pro-Asn-Arg-Phe-Arg-Gly-Lys- Asp-Leu-Pro-COOR' szekvencia - ahol R' „elentése cisztein - bizonyított és alapvető homológiában van mind a gD-1, mind a gl)-2 amino-terminális övezetében fennálló, nem- glikolizilczett amiiiosav-szekvenciával. Ez a polipeptid magában foglalja a fentebb jellemzett, hidrofil Met-Ala-Asp-Pro-Asn-Arg szekvenciát, és immunreaktív (immunreakcióra képes) egy VII csoporthoz tartozó monoklón 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 GO G5 7
