195657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás karbociklusos purin nukleozidok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 195 657 __ pHlO UVAmax lm[: 258 /váll/, 270, Elemanalízis a C, 1H,502N5 összegképlet alapján /mólsúly 249,27/: számított: C 53,00% H6,07% N 28,10%; talált: C 52,81% H 5,86% N 27,83%. /a/p5* -4,74 /c = 0,57, dimetil-formamid/. 9-/( IS,4R)4-hidroxi-mct il-cikloperi tán-l-íl/-hipoxantint kapunk, ha az 1. példában N6-benzoil-6’-0-(4,4,-dimetoxi-tritiI)-3’-0-/(imidazol-l -il)-tiokarbonü/-2’ -dezoxiariszteromicin 'helyett a hipoxantin-származékot kezeljük az 1—3. példában leírt módon. Elemanalízis a C, iH14N402 összegképlet alapján /mólsúly 234,25/: számított: C 56,40% H6,02% N 23,92%; talált: C 56,81% 116.33%. N 24,25%. 5. pékla (1) 9-/(lR,3S,4R)-4-hidroxi- metil-3- hidroxi-ciklopentán-1 -il/-hipox'anlin 12,4 g 720 mm ól/ 3. összehasonlító példa szerinti vegyületet 200 ml tokióiban oldunk és 10,46 g/40mmól/ tetrabutil-ammónium-fluoridot adunk hozzá, majd 2 órán keresztül 75 °C hőmérsékletre melegítjük. A reakcióelegyet szárazra pároljuk és a maradékot vízben oldjuk. Az oldatot 30 g aktív szénnel kezeljük és a terméket metanol/etil-éterből atkristályosítjok. így 4,6 g színtelen kristályokat kapónk, amelynek olvadáspontja 170 °C. Elemanalízis a Cj |U)4N403 x H20 összegképlet alapján /mólsúly 268,27/: számított: C 49,25% 116,01% N 20,88%; talált: ____C 49,08% H 5,86% N 20,81%. 62) 9-/(ÍR)3S,4R)4-monometoxi-tritil-oxi- metil-3--hidroxi-ciklopcntán-l-il'/-hipoxantin 2,3 g /9,2 mmól/ 1. pont szerinti kristályos vegyületet 100 ml piridinben oldunk, majd 3,1 g /10 mmól/ monometoxi-tritil-kloridot adunk hozzá és 5 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. Ezután szilikagélen CHClj/MeOH 40:1-6:1 eluenssel kromatografálva tisztítjuk és így 4,3 g porszerű cím szerinti terméket kapunk, A tennék egy részét kloroform/éter elegyből átkristályosítjuk. Olvadáspont 244-246 °C. Elemanalízis a C31H30B404 x H20 összegképlet alapján /mólsúly 531,60/: számított: C 70,04% H 5,88% N 10,54%; talált: C 70,39% H 5,77% N 10,38%. (3) 9-/(lS,4R)-4-monometoxi-tritil- oxi- metil- ciklopentán-l -il/-hipoxantin 4,32 g /8,27 mmól/ 2. pont szerinti vegyületet 70 ml toíuolban oldunk, hozzáadunk 2,2 g /12,4 mmól/ tiokarbonil-diimidazolt és 5 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük- Ezután szárazra pároljuk és a maradékot szilikagélen CHCl3/MeOH 100:1-60:1 eleggyel kromatográfiásan tisztítjuk, amelynek során 5,2 g sárga port kapunk. Ezt 90 ml toíuolban oldjuk és 3,4 ml /12,-4 mmól/ tributü-óuhidriddel és 270 mg /1,6 mmól/ Ct, ö’-azo-bisz-izobutilonitrillel reagáltatjuk a 3. összehasonlító példában leírt módon, majd szilikagélen etil-acetát/meOH = = 9:1 eluenssel kromatográfiásan tisztítjuk. így 1,63 g cím szerinti terméket kapunk. A termék egy részét metanol/etil-éter elegyből átkristályosítjuk, olvadáspont 175-177 °C. .Elemanalízis a C3iH3o^403 x 1/2 H20 összegképlet alapján /mólsúly 515,60/: számított: C 72,21% II 6,06% N 10,87%; talált: C 72,69% H 5,88% N 10,92%. 6 ’ (4) 9-/(lS,3R)-4-hidroxi-metil-cik]opentán-l-i!/-guanin A 3. pont szerinti vegyületből a 4—8. összehasonlító példák szerint kapjuk a cím szerinti vegyületet. 6. példa Orális adagolásra alkalmas tabletta: 200 mg 2’, 3’-didezoxi-ariszteromocin, 300 mg laktóz, 50 mg keményítő és 2 mg magnézium-sztearát. A komponenseket metanolban összekeverjük, majd melegítéssel a metanolt eltávolítjuk és a maradékot tablettává olvasztjuk. 7. példa Injekció: 500 mg 2’, 3’-didezoxi-ariszteromicint 10 ml sterilizált vízben oldunk és vizes nátrium-hidroxiddaJ pH = 6,0 értékre állítjuk. Az oldatot szűrjük, sterilizáljuk és fiolákba zárjuk. 1. haídstani példa Anyagok és módszerek /Antimicrob. Agents Chemother, 30, 6. sz. 933-937 /1986// Sejtek: 1 típusú HTLV sejthordozó vonalat MT4 és HIV HTLV-3 termelő sejtvonalat Molt-4/HIV HTLV-III alkalmaztunk. A sejteket REMI 1640 közegben tartottuk 37 °C hőmérsékleten C02 inkubátorban. A kO. .3. >; . 3 0% borjűmagzat szérumot, ml-ként 100 NE penicillin! és 100 pg sztreptomicint adtunk. Vírus és vírusfertőzés: A HÍV HTLV-III-at a Molt■4/H1V HTLV-III felülúszó kultúrából /Virology 146, 272 (1985)/ nyertük. A vmiskészítmény titere 6 x 104 PFU/ml. Az MT-4 sejteket a HÍV HTLV-III vírussal 0,002 fertőzések sorozatával fertőztük. A sejteket a vímsoldattal összekevertük és 1 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten inkubáltuk. Adszorpció után a fertőzött sejteket mostuk és 3 x 105 sejt/ml koncentrációban friss közeggel szuszpendáltuk. A tenyésztést a fenti koncentrációban végeztük karbociklikus 2’, 3’-didezoxi-nukleozid jelenlétében vagy távollétében C02 inkubátorban 37 °C hőmérsékleten 6 napon keresztül. A HÍV HTLV-III sejtkárosító hatásának vizsgálata: A sejtkárosító hatást az életképes sejtek számának csökkenéséből állapítottuk meg. Az életképes sejteket a tdpán kék kizárásos színezés módszerével számláltuk. A HÍV HTLV-III antigén kifejeződésének vizsgálata: A vírusra jellemző antigénnel rendelkező HTLV-III-mal fertőzött MT-4 sejteket közvetett /immunofluorescens/ íítódszéirel számláltak. Ehhez a metanollal fixáit sejteket hígított anti HIV-HTLV-IIÍ pozitív emberi szérummal inkubáltuk 30 percen keresztül 37 °C hőmérsékleten. A készítményt ezután 15 percen keresztül foszfát puffer sóoldattal mostuk. A sejteket fluorescensz izo-tiocianáttal konjugált nyúl anti-humgn immunoglobulin G /Dakoppats A/S, Koppenhága, Dánia/ segítségével inkubáltuk 30 percen keresztül 37 °C hőmérsékleten, majd ismét foszfáttal pufferált sóoldattal mostuk. Fluorescensz mikroszkóp alatt több mint 500 sejtet számláltunk és az IF pozitív sejtek százalékos arányát számoltuk. A fenti vizsgálatokból megállapítottuk, hogy ; az új hatóanyagok kifejezett anti HÍV HTLV-III aktivi. lássál rendelkeznek. A 2’, 3’-didezoxj-ariszteromicin ese-2 5 10 15 20 25 30 10 ■5 50 55 60 65
