195535. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szarvasmarha növekedési hormont vagy prehormont meghatározó bázis sorrendet tartalmazó DNS transzfer vektor előállítására
1 195 535 2 A találmány tárgya eljárás szarvasmarha pre-növekedési hormont vagy növekedési hormont meghatározó nukleotid sorrendet tartalmazó DNS transzfer vektor, továbbá szarvasmarha növekedési hormont meghatározó nukleotid-szekvencia előállítására. A szarvasmarha pre-növekedési hormont meghatározó szekvenciát tartalmazó DNS transzfer vektor előállítására a találmány egyik előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy a szarvasmarha pre-növekedési hormont meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvenciát olyan DNS molekulával reagáltatunk, amit egy transzfer vektor restrikciós enzimmel való hasításával állítottunk elő. A találmány egy másik előnyös kivitelezési változata szerint a szarvasmarha pre-növekedési hormont meghatározó dczoxi-nukleotid-szckvcncia egy alábbi plusz, szálat tartalmaz: 5' - ATG ATG GCT GCA GGC CCC CGG ACC TCC CTG CTC CTG GCT TTC GCC CTG CTC TGC CTG CCC TGG ACT CAG GTG GTG GGC GCC TTC CCA GCC ATG TCC TTG TCC GGC CTG TTT GCC AAC GCT GTG CTC CGG GCT CAG CAC CTG CAC CAG CTG GCT GCT GAC ACC TTC AAA GAG TTT GAG CGT ACC TAC ATC CCG GAG GGA CAG AGA TAC TCC ATC CAG AAC ACC CAG GTT GCC TTC TGC TTC TCC GAA ACC ATC CCG GCC CCC ACG GGC AAG AAT GAG GCC CAG CAG AAA TCA GAC TTG GAG CTG CTT CGC ATC TCA CTG CTC CTC ATC CAG TCG TGG CTT GGG CCC CTG CAG TTT CTC AGC AGA GTC TTC ACC AAC AGC TTG GTG TTT GGC ACC TCG GAC CGT GTC TAT GAG AAG CTG AAG GAC CTG GAG GAA GGC ATC TTG GCC CTG ATG CGG GAG CTG GAA GAT GGC ACC CCC CGG GCT GGG CAG ATC CTC AAG CAG ACC TAT GAC AAA TTT GAC ACA AAC ATG CGC AGT GAC GAC GCG CTG CTC AAG AAC TAC GGT CTG CTC TCC TGC TTC CGG AAG GAC CTG CAT AAG ACG GAG ACG TAC CTG AGG GTC ATG AAG TGC CGC CGC TTC GGG GAG GCC AGC TGT GCC TTC TAG - 3', ahol A dezoxi-adenilcsoport, G dezoxi-guanilcsoport, C dezoxi-citozilcsoport, és T timidilcsoport. A szarvasmarha növekedési hormont meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvencia előállítására a találmány egy további előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy a szavarmarha pre-növekedési hormont meghatározó cDNS dezoxi-nukleotid-szekvenciát a Hae II restrikciós enzimmel hasítjuk, és a hasított terméket a DNS-polimeráz I Klenow-fragmensével, a T4 DNS-polimerázzal, vagy 3'-5'-exonukleázzal inkubáljuk. A szarvasmarha növekedési hormont meghatározó szekvencia előállítására a találmány egy további előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy a fenti Klenow-fragmenssel végzett inkubációt dATP jelenlétében végezzük, és a kapott terméket Sl-nuklcázzal emésztjük, amiután a szarvasmarha növekedési hormon 2—191, aminosavát meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvenciát kapunk, végeredményben pedig olyan szarvasmarha növekedési hormont meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvenciát, amely egy alábbi bázis-sorrendű plusz szálat tartalmaz: 5' - TTC CCA GCC ATG TCC TTG TCC GGC CTG TTT GCC AAC GCT GTG CTC CGG GCT CAG CAC CTG CAC CAG CTG GCT GCT GAC ACC TTC AAA GAG TTT GAG CGT ACC TAG ATC CCG GAG GGA CAG AGA TAC TCC ATC CAG AAC ACC CAG Gi f GCC TTC TGC TTC TCC GAA ACC ATC CCG GCC CCC ACG GGC AAG AAT GAG GCC CAG CAG AAA TCA GAC TTG GAG CTG CTT CGC ATC TCA CTG CTC CTC ATC CAG TCG TGG CTT GGG CCC CTG CAG TTT CTC AGC AGA GTC TTC ACC AAC AGC TTG GTC- TTT GGC ACC TCG GAC CGT GTC TAT GAG AAG CTG AAG GAC CTG GAG GAA GGC ATC TTG GCC CTG ATG CGG GAG CTG GAA GAT GGC ACC CCC CGG GCT GGG CAG ATC CTC AAG CAG ACC TAT GAC AAA TTT GAC ACA AAC ATG CGC AGT GAC GAC GCG CTG CTC AAG AAC TAC GGT CTG CTC TCC TGC TTC CGG AAG GAC CTG CAT AAG ACG GAG ACG PAC CTG AGG GTC ATG AAG TGC CGC CGC TTC GGG GAG GCC AGC TGT GCC TTC TAG - 3’, ahol A dczoxi-adenilesoport, G dczoxi-guanilcsoport, C dc/oxi-cito/ilcsopori, és T timidilcsoport. A szarvasmarha növekedési hormont meghatározó szekvencia előállítására a találmány egy további előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk él, hogy az előzőekben említett Klenow-fragmenssel való inkubációt dATP, dGTP, dCTP és dTTP jelenlétében végezzük, a kapott terméket a fenti Klenow-fragmenssel, T4 DNS- polimerázzal, vagy S’-ő’-exonukleázzal inkubáljuk dCTP jelenlétében, majd az így kapott terméket Sl-nukJeázzal emésztjük, amiután a szarvasmarha növekedési hormon 1-191. aminosavát meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvenciát kapunk, végeredményben pedig olyan, a szarvasmarha növekedési hormonét meghatározó dezoxi-nukleotid-szekvenciát, amely az alábbi bázis-sorrendű plusz szálat tartalmazza: 5' - GCC TTC CCA GCC ATG TCC TTG TCC GGC CTG TTT GCC AAC GCT GTG CTC CGG GCT CAG CAC CTG CAC CAG CTG GCT GCT GAC ACC TTC AAA GAG TTT GAG CGT ACC TAC ATC CCG GAG GGA CAG AGA TAC TCC ATC CAG AAC ACC CAG GTT GCC TTC TGC TTC TCC GAA ACC ATC CCG GCC CCC ACG GGC AAG AAT GAG GCC CAG CAG AAA TCA 1 GAC TTG GAG CTG CTT CGC ATC TCA CTG CTC CTC ATC CAG TCG TGG CTT GGG CCC CTG CAG TTT CTC AGC AGA GTC TTC ACC AAC AGC TTG GTG TTT GGC ACC TCG GAC CGT GTC TAT GAG AAG CTG AAG GAC CTG GAG GAA GGC ATC TTG GCC CTG ATG CGG GAG CTG GAA GAT GGC ACC CCC CGG GCT GGG CAG ATC CTC AAG CAG ACC TAT GAC AAA TTT GAC ACA AAC ATG CGC AGT GAC GAC GCG CTG CTC AAG AAC TAC GGT CTG CTC TCC TGC TTC CGG AAG GAC CTG CAT AAG ACG GAG ACG TAC CTG AGG GTC ATG 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
