195523. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav frakciók és ilyen terméket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 195 523 2 és hasznosítani. Ennek megfelelően a szabadalom szerzői a 750 000-nél kisebb átlagos molekulatömegű frakciókat mint haszontalan mellékterméket elkülönítik, éppen gyulladáskeltő tulajdonságuk miatt. Az idézett szabadalom kitanításától eltérően azt találtuk, hogy a szerzők által a 750 000-nél alacsonyabb átlagos molekulatömegű frakcióknak tulajdonított gyulladáskeltő hatás tulajdonképpen a 30 000-nél kisebb átlagos molekulatömegű szennyeződéseknek tulajdonítható. A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi, hogy sorozatos molekulaszűrési lépésekkel és ezekhez kapcsolódó kémiai módszerekkel a 30 000-nél kisebb molekulatömegű gyulladáskeltő hatású frakciót elkülönítsük. A találmány szerinti eljárással a hialuronsav új, hasznos, gyulladáskcltő aktivitástól mentes frakcióit tudjuk előállítani, amelyek együttesen a különböző kiindulási anyagokból kinyert hialuronsavhoz viszonyítva mintegy 80%-os teljes kitermelést jelentenek. A rendelkezésre álló hialuronsavnak ez a 80%-os kitermelése a Hyalectin és a Hyalastine frakciók kombinációjából jön össze, amelyek átlagos molekulatömege kb. 250 000 és 350 000 között van. Közelebbről, a Hyalectin frakciót a rendelkezésre álló HA-ra vonatkoztatva mintegy 30%-s kitermeléssel tudjuk elkülöníteni, és a Hyalastine-t kb. 50%-os kitermeléssel kapjuk a kündulási anyagként használt szövetekből kinyerhető HA-ra vonatkoztatva. Ez a tényező fontos javulást jelent akorábban említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett módszerhez viszonyítva, mert azt találtuk, hogy a rendelkezésre álló hialuronsavnak a korábban feltételezettnél lényegesen nagyobb hányada hasznosítható gyógyászati célokra. Az említett amerikai egyesült államokbeli szabadalom szerzői, azzal, hogy csak a 750 000-nél nagyobb átlagos molekulatömegű frakciót hasznosították, a kiindulási, az állati szervekből rendelkezésre álló hialuronsavhoz viszonyítva csak mintegy 10%-os kitermelést értek el, míg a teljes hialuronsav mennyiségének mintegy 90%-át veszni hagyták. így a találmány szerinti eljárással a teljes hialuronsav-extraktum lényegesen nagyobb hányadának hasznosítása válik lehetővé. A hialuronsav különböző frakcióinak extrahálásakor kapott relatív kitermelések összehasonlítása az 1. táblázatban található. 1. Táblázat A hialuronsav típusa g/100 g friss szövet % Hivatkozás Kakastaréj teljes hialuronsav tartalma 0,8 100 Swann D. A. 1968, Bioclüm, Biophys. Acta 156, 17-29. HA (Balázs-típus) 0,08 10 4 141 973 számú Hyalectin + Hyalastine 0,6 80 USA-beli szabadalmi leírás a jelen találmány Hyalectin 0,2 30 a jelen találmány Hyalastine 0,4 50 a jelen találmány Gyalladáskeltő frakció 0,16 20 a jelen találmány Az 1. ábra grafikusan mutatja be a találmány szerint azonosított különböző MA-frakciókat. A folyamatos vonallal kihúzott harang alakú görbe az 1. ábrán a kiindulási szövetekből hozzáférhető HA frakciók eloszlását mutatja. Az 1. ábrán a „B ’ terület a 4 141 973 számú a nerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban g/ógyászatilag aktívnak leírt frakciót jelöli. Az 1. ábrán az I és 11 területek és az „A" terület a találmány szerint azonosított frakciók, az „A" terület a 30 000-nél kisebb molckulatömcgű gyulladáskcltő hatást mutató frakció, az I-es terület a Hyalastine frakció, míg a II terület a Hyalectin frakció. A grafikonról leolvasható, hogy az említett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás s. érint a 750 000-nél kisebb átlagos molekulatömegű l’a-frakciók elkülönítése következtében a kivonható HA mennyiség legnagyobb részét elöntik. Ugyanakkor a találmány szerint a rendelkezésre álló HA mennyiség nagy részének gyógyászati célú felhasználása válik lehetővé, mivel a korábbi kutatók által különböző HA- e etraktumokban megfigyelt gyulladáskeltő hatást csak a 30 000-nél kisebb molekulatömegű hialuronsav-frakció okozza. A találmány szerinti eljárás kidolgozása során azt találtuk, hogy a rendelkezésre álló HA mennyiség nagy százaléka hasznosítható gyógyászati célra, ha az elkülönítést, a speciális gyógyászati alkalmazási céltól függően, a találmány szerinti eljárással végezzük. Míg az idézett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás szerint a rendelkezésre álló HA mennyiségnek csak mintegy 13%-át hasznosítják, a találmány szerint a rendelkezésre álló HA mennyiségnek kb. 80?Ha hasznosítható, akár Hyalastine frakció formájában, amely a sebgyógyulást segíti elő, akár az intraokuláris és intraartikuláris felhasználásra alkalmas Hyalectin frakció formájában, akár a Hyalastine és Hyalectin frakciók kombinációjának alakjában, amely szintén alkalmazható a sebgyógyulás elősegítésére. Megvizsgáltuk az elkülönített frakciók kémiai és fizikai tulajdonságait is. A kapott eredményeket a 2. táblázatban foglaltuk össze. A találmány tárgya tehát olyan eljárás új, lényegileg tiszta és gyuliadástkeltő hatástól mentes hialuronsavfi akciók előállítására hialuronsavat tartalmazó anyagok, előnyösen hialuronsavat tartalmazó testszövetek oldószeres extrakciója útján kapott nyers hialuronsaveiegyekből, amelynek során a kívánt esetben enzimes előkezelésnek alávetett nyers hialuronsav-elegyből molekulaszűrés, célszerűen 30 000 dalton kizárási határú membránnal végzett molekulaszűrés útján egy 30 000- nál kisebb molekulatömegű hialuronsavtól lényegileg mentes első hialuronsav-frakciót különítünk el, amely a jelen leírásban Hyalectine-nek és Hyalastine-nek nevezett frakciók clegyét tartalmazza: az így kapott első h aluronsav-frakcióból kívánt esetben 200 000 molekulatömegnek megfelelő kizárási határú membránnal végzett további molekula-ultraszűrés útján kizárjuk a 200 000- nél nagyobb molekulatömegű molekulákat és ezt az ultraszűrést addig folytatjuk, míg az elegy térfogata az e;edetinek egy tizedére nem csökken, a membránon átír ént elegyet összegyűjtjük, és így egy 50 000 és 100 000 közötti átlagos molekulatömegű második, a jelen leírásb in Hyalastine-nek nevezett hialuronsav-frakciót különítünk el; és kívánt esetben a 200 000 molekulatömegnek megft lelő kizárási határú membránnal végzett molekula-3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 85
