195112. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ondó termékenyítőképességének fokozására
195112 ján történő megtermékenyülés nem lehetséges. 5. A gamma-amino-vajsav a kereskedelmi forgalomban kapható egyik legolcsóbb aminosav, eljárásunkhoz igen kis koncentrációban szükséges, (0,5—0,05 mM), tehát rendkívül kis többletköltséggel jár alkalmazása. 6. Eljárásunk nem igényfel költséges berendezést (például mélyhűtő-berendezést), sem jelentősebb manuális munkát. Segítségével szobahőmérséklet közelében (16— 18°C) biztosítható a sperma eltartása. Találmányunk szerinti eljárást, az eljárással kapott anyaggal végzett kísérletek eredményeit, az eredmények értékelését az alábbi példákon mutatjuk be. 1. példa 1000 ml „kijevi hígítóban” 10,3 mg GABA-t oldunk és ezel 1:1 térfogatarányban hígítjuk a spermát. A felhasználás előtt azonos hígítóoldat 1000 ml-ében 103 mg GABA-t oldunk és ezzel újból 1:1 arányú hígítást végzünk. Ezután elvégezzük a mesterséges inseminálást, az eredményeket a kísérleti részben tüntetjük fel és értékeljük. 2. példa Mindenben az 1. példában leírtak szerint jártunk el azzal az eltéréssel, hogy hígítóként a leíró-részben ismertetett „Szerdzsakféle” hígítót használtunk, és a hígítást mindkétszer 1:2 arányban végeztük el. 3. példa Mindenben az 1. példában leírtak szerint jártunk "el, azzal az eltéréssel, hogy hígítószerként „Beltshille-F3” hígítót használtunk, és a hígítást mindkétszer 2:1 arányban végeztük el. 4. példa Kiszerelt készítmény: I. fázis: 60,0 g d-glükóz-mono hidrát (Stabilizáló oldat) 3,7 g trinátrium-citrát 3.7 g dinátrium-EDTA 1.2 g NaHCOg 10,3 g GABA 500 000 NE penicillin 500 mg sztreptomicin 1000 ml desztillált vízben oldva II. fázis: 60,0 g d-glükóz-monohidrát (Hígító oldat) 3,7 g trinátrium-citrát 3.7 g dinátrium-EDTA 1.2 g NaHCOg 500 000 NE penicillin 500 mg sztreptomicin 103 mg GABA 1000 ml desztillált vízben oldva 5 kísérleti rész Vizsgálati módszerek A motilitás meghatározása ' A motilitás meghatározását az általánosan használatos szubjektív, vizuális megfigyeléssel végeztük, fénymikroszkóppal, 200 x-os nagyítást alkalmazva. A motilitás megítélésénél az előrehaladó mozgás intenzitását és a mozgó spermiumok százalékos arányát vettük figyelembe. A kísérletek során az értékelő személy nem ismerte a minták kezelését (vak kísérlet). A kezdeti motilításra gyakorolt hatás vizsgálata A kan sertéstől mesterséges vaginával, ejaculáció útján nyert friss spermát 1:1 arányban hígítottunk GABA-t nem tartalmazó, ill. 0,001 — 10 mM GABA-t tartalmazó kijevi hígítóval. A motilítást közvetlenül a hígítás után fütött tárgylemezen határoztuk meg. Az eltarthatóságra gyakorolt hatás vizsgálata A fenti módon nyert és hígított sperma mintákat 24 órán át 16—18°C-on tartottuk el, majd a motilitás értékeket meghatároztuk. Az eltartás utáni GABA adagolás hatásának vizsgálata A fenti módon eltartott sperma mintákhoz 1:1 térfogatarányban 1 mM-os GABA tartalmú kijevi hígítót adtunk, és a motilítást a fentiek szerint határoztuk meg. Hötűrési vizsgálatok A frissen nyert spermát GABA-t tartalmazó (0,001—10 mM) vagy anélküli (kontroll) kijevi hígítóval 1:1 arányban hígítottuk, és 1, 2,ill. 3 óra hosszat 38°C-on inkubáltuk. A jelzett időpontokban a motilítást az előzőek szerint határoztuk meg. Statisztika Minden kísérletet hét különböző kantól származó spermamintával, hét független kísérlet formájában végeztük. Adatainkat a hét mérés átlagaként ± S.E.M. adtuk meg. Az eltérések szignifikanciáját kétmintás t-próbával határoztuk meg. Vizsgálati eredmények A GABA a vizsgált koncentráció tartományban (0,001 —10 mM) a spermiumok kezdeti motilitását nem befolyásolta (l. táblázat, felső sora). Ugyanakkor 24 órás, 16—18°C-on történő eltartás után 0,5—0,05 mM GABA koncentráció jelenlétében fokozódott a motilitás a kontrolihoz viszonyítva (2. táblázat). 5 mM-os GABA koncentráció esetében, bár statisztikusan nem szignifikáns, de tendenciájában megfigyelhető a motilitás fokozódás. A többi koncentrációknál bár a motilitás nem fokozódott, de nem is csökkent a kontrolihoz viszonyítva (2. táblázat). A 24 órás eltartást követően 1 mM-os koncentrációban történő GABA-adagolás valamennyi mintában fokozta a motilítást, beleértve az eltartás során GABA-t nem tartalmazó kontrollt is. A legerőteljesebb hatást annál a mintánál tapasztaltuk, mely az eltartás során 6 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
