194942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
194942 formban oldjuk és az oldatot 10 darab szilikagél („Kiesel Gél 60 F254”, a Merck Co. terméke) vékonyrétegre visszük fel. A szilikagél lemez 0,25 mm vastag, 20x20 cm méretű. A ditriszarubicin D, E, F, G és GR zónákat futtatószerként kloroform, metanol, tömény vizes ammónia 100:5:0,02 arányú elegyét alkalmazva elkülönítjük, majd a szétvált zónákat öszszegyűjtjük és az anyagot a szilika gél ről kloroform, metanol 10:1 arányú elegyével eluáljuk. Az így kapott frakciókat bepároljuk, majd nagynyomású folyadék-kromatográfiás eljárással tisztítjuk. Az elválasztásra 20 mm átmérőjű, 300 mm magas, „Nucleosil 5C18” töltetű (a Nagel Co. terméke) oszlopot és 0,45% vizes foszforsavat tartalmazó acetonitril oldószerelegyet alkalmazunk. A megfelelő eluátumot nátrium-hidrogén-karbonáttal semlegesítjük, majd kloroformmal extraháljuk. A kloroformos fázist szárazra pároljuk. A visszamaradó anyagot kloroform és metanol 1:1 arányú elegyében oldjuk, az oldatot 2,0 cm átmérőjű, 28 cm magas Cephadex LH-20 töltetű oszlopra visszük és azonos oldószerelegygyel ekvilibráljuk. Az eluálást ugyanezzel az oldószereleggyel végezzük, majd az eluátumot vákuumban szárazra pároljuk. Ily módon a ditriszarubicin D-t, E-t, F-t, G-t, illetve GR-t 32,0, 31,5, 30,5, 65,5, illetve 67,5 mg menynyiségben nyerjük. A kapott termékeket vékonyréteg-kromatográfiás eljárással és „Nucleosil 5C18” töltetű oszlopon végzett nagynyomású folyadék-kromatográfiás eljárással megvizsgálva valamennyi terméket homogénnek találtunk. 3. Példa 50 mg ditriszarubicin G-t és GR-t 0,1 n hidrogén-kloridban 30°C-on 20 percig reagáltatunk. A reakcióelegyet extraháljúk és az extraktumokat szilikagélen kromatografáljuk. A DTR-G-t vagy DTR-GR-t 100:3 arányú kloroform-metanol eleggyel eltávolítjuk, majd 100:5 arányú kloroform-metanol eleggyel végezzük az eluálást. A megfelelő eluátumokat vákuumban szárazra pároljuk. A viszszamaradó anyagból készült oldatot „Cephadex LH-20” töltetű oszlopra visszük, majd az anyagot az oszlopról 1:1 arányú kloroform-metanol eleggyel eluáljuk. Ily módon 25 mg DTR-G/de-Ro-t és 15 mg DTR-GR/de-Ro-t nyerünk. Az így kapott termékek vékonyréteg-kromatográfiás és nagynyomású folyadék-kromatográfiás vizsgálattal homogénnek bizonyulnak. 4. Példa 800 mg DTR-B, C, CR, szerirubicin (SR) és 1-hidroxi-szerirubicin (HSR) elegyet — amelyet az 1. példa c) lépesében-végzett gradiens eluálás D, E, F, G és GR frakciók előtt lejövő eluátumának bepárlásával kapunk —« kevés kloroformban oldunk, és a kapott oldatot 80 darab szilikagél („Kiesel Gél 60 F254”, a Merck Co. terméke) vékonyrétegre visszük fel. A vékonyréteg lemezek vastagsága 0,25 mm, mérete 20x20 cm. Futtatóelegy-21 12 ként 100:5:0,02 arányú kloroform — metanol-tömény vizes ammónia elegyet használunk, majd a DTR-CR, SR és HSR zónákat összegyűjtjük és 10:1 arányú kloroform-metanol eleggyel eluáljuk. Az eluátumot szárazra pároljuk, majd a DTR-CR és HSR frakciókat 20 darab, a fentivel azonos szilikagél rétegre visszük fel. Futtatóelegyként 25:1:0,08 arányú etil-acetát-metanol-tömény vizes ammónia elegyet alkalmazunk. A foltok anyagát összegyűjtjük, eluáljuk, az eluátumot bepároljuk, majd minden egyes frakciót 3 darab, az előzővel azonos vékonyrétegre visszük fel, majd az anyagot 100:5:0,02 arányú kloroform-metanol — tömény vizes ammónia elegygyel eluáljuk. így eltávolítjuk a kis mennyiségben jelen lévő DTR-B maradékot. Az eluátumot szárazra pároljuk, és a DTR-CR és HSR frakciót oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, („Cephadex LH-20”, eluens: metanol), majd vákuumban szárazra pároljuk. Ily módon 9,3 mg DTR-CR-t nyerünk vörös por formájában és 13,7 mg HSR-t nyerünk vöröses-narancs por formájában. Mindkét kapott anyag vékonyréteg-kromatográfiás és fordított fázisú nagynyomású folyadék-kromatográfiás vizsgálat alapján homogénnek bizonyult. A következőkben az ábrák jelentését ismertetjük. Az 1 —18. és 23—25. ábrák az a-h és k jelölésű vegyületek IR, NMR és UV spektrumát mutatják a következők szerint: Ábra száma Spektrum Vegyület jele 22 1. IR a 2. NMR a 3. IR b 4, NMR b 5. IR c 6. NMR c 7. UV d 8. IR d 9. NMR d 10. UV e 11 . IR e 12. NMR e 13. IR f 14. NMR f 15. IR g 16. NMR g 17. IR h 18. NMR h 23. UV k 24. IR k 25. NMR k A 26. ábrán a találmány szerint előállított antraciklinszármazékok szerkezetmeghatározási eljárásának vázlatos folyamatábráját mutatjuk be. A 27—34. ábrákon a találmány szerint előállított antraciklinszármazékokból a szerkezetmeghatározási eljárás során kapott bomlástermékek NMR spektrumát mutatjuk be. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
