194942. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antraciklin származékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
194942 19 9. Táblázat Vegyület IC50 / ug/ml/ DTR-D 0,0040 DTR-E 0,0070 DTR-F 0,0038 DTR-G 0,0045 DTR-CR 0,0040 DTR-GR 0,0042 DTR-G/de-Ro 0,012 DTR-GR/de-Ro 0,020 1-HSR 0,012 2.) Tumor-ellenes hatás L 1210 leukémiasejtekkel fertőzött egéren CDF, egerek egy csoportjába intraperitoneálisan L 1210 leukémiasejt-szuszpenzió* 5 viszünk be egerenként lxlO5 sejt mennyiségben. A sejtek beültetése után azonnal intraperitoneálisan 0,25 ml vizsgálandó vegyületet injektálunk be az egerekbe. Valamennyi vizsgálandó vegyületet 10 napon át adagol- 10 juk. A megfigyelést 30 napon át végezzük, és megadjuk a százalékos túlélést, 100-nak tekintve azoknak a napoknak a számát, amenynyivel a fiziológiás sóoldattal kezelt kontrollcsoport túlélte a leukémiasejtek beültetését. 15 Az eredményeket a 10. táblázatban ismertetjük. 20 10. táblázat Dózis [mg/kg/nap] DTR-D Túlélés DTR-E DTR-F /%/ DTR-G 1-HSR 1 — _ — — . Toxin 1 14 0,5--139 0,25 131 106 Toxin 1 33 Toxin 125 145 0,125 1 14 156 152 138 151 0,0625 142 163 1 33 163 127 0,0313 125 119 127 117 108 0,0156 102 102 1 20 1 1 1-0,0078 97 102 101 109-A következőkben a találmány szerinti eljárást példákban mutatjuk be. A példák szerint előállított termékek fizikai állandói a le- 40 író részben, a 2—1., 2—2., 2—3., 2—4., 4. és 8. táblázatokban megadott értékekkel azonosak. 1. Példa a) Inokulum előállítása Az alábbi összetételű táptalajt alkalmazzuk: Galaktóz 2% Dextrin 2% Bacto-soytonR (Difco Láb.) 1% Kukoricalekvár 0,5% Kalcium-karbonát 0,1% A táptalaj pH-ját sterilezés előtt 7,4-re állítjuk. 100 ml fenti táptalajt 500 ml-es kónikus lombikba töltünk és sterilezzük. A steril táptalajt platina oltókaccsal Streptomyces cyaneus MG 344-hF 49 ferdeagar tenyészetről levett oltóanyaggal oltjuk be, majd 27°C-on 72 órán át rázatjuk. b) Fermentálás Az alábbi összetételű táptalajt alkalmaz zuk: Dextrin 3% Glükóz 0,3% Toast-soya (a Nissin-Seiyu Co. szójaliszt készítményének márkaneve) 2% Kobalt-klorid 0,12 g/1 Kalcium-karbonát 0,3% 15 liter fenti táptalajt 30 literes termen torba töltünk, sterilezzük, majd 500 ml, az a) lépés szerint készített inokulummal beoltjuk. A fermentálást 27°C-on, percenként 150 fordulatos keverés és 15 l/perc arányú levegőztetés mellett 90 órán át folytatjuk. c.) A ditriszarubicinek kinyerése 50 A b) lépés szerint nyert tenyészetet megszűrjük, a szűrlet pH-ját 8,0-ra állítjuk, majd ■a szürletet 10 1 butil-acetáttal extraháljuk. A fázisokat szétválasztjuk, a felső fázist bepároljuk. íly módon 20_g olajat nyerünk. A ka 55 pott olajat kevés kloroformban oldjuk,majd az oldatot 100 g szilikagéllel („Kiesel Gél 60”, a Merck Co. terméke) töltött oszlopon engedjük át és (100:0) — (100:10) között változó ará nyú kloroform-metanol eleggyel gradiens eluá gQ lást végzünk. A ditriszarubicin D-t, E-t, F-t, G-t és GR-t tartalmazó frakciókat bepároljuk. Ily módon 230 mg ditriszarubicin elegyet nyerünk vörös por formájában. 2. Példa Az 1. példa szerint előállított vörös por formájú nyerstermék 100 g-ját kevés kloro-1 1
