194938. lajstromszámú szabadalom • Eljárás javított nukleinsav-reagensek előállítására
194938 22 A 7. táblázat sorolja fel a szóban forgó fragmensek méretét, a szubklónozáshoz használt vektorokat, a rekombináns plazmidok nevét és ezek alkalmazását. A 15. ábra mutat21 ja be a nukleinsav-fragmensek sorozatát, amely akkor képződik, amikor a 7. táblázatban felsorolt fragmenseket alkalmazzuk. 7. Táblázat Fragmens Méret Vektor Rekombináns plazmid Alkalmazás a i F.coRI-Pstl 1 ,1kb M13mp10 mKTH1364 Szűrő ai EcoRI-PstI 1, 1kb Ml3mp11 mKTHl365 Szűrő ^2 Pstl-BamHI 1,5kb M13mp10 mKTHl366 Szűrő a2 Pstl-BamHI 1,5kb M13mp11 mKTH1367 Szűrő bi HindlII-EcoRI 1,9kb pBR325 PKTH1361 Jelzett vizsgáló minta b2 Pstl-PstI 1,8kb pBR.322 PKT111361 Jelzett vizsgáló minta b3 HindlII-BamHI 1,3kb pBR322 pKTH1363 Jelzett vizsgáló minta Herpes simplex vírus 2. típus \ ÜSY2 DNS-t izoláljuk és Hind 111 restrikciós enzimmel emésztjük ismert módszerek szerint, és az így létrejövő Hindlll fragmenst pBR322 plazmidba klónozzuk és Escherichia coli K12 HB101 gazdaszervezetbe visszük át. Egy 9,5 kb-s Hindlll fragmenst választunk ki, és ezt pKTH1351-nek nevezzük el. A HSV1 klón mutat bizonyos keresztaktivitást HSVl-gyel, de más vizsgált nukleinsavval nem. A szubklónozást vektorként a pBR322 plazmidot és az M13mpl0 és M13mpll fágokat alkalmazva hajtjuk végre. A 16. ábra mutatja be a pKTH1351 rekombináns plazmidot 30 és a Hindlll és PstI restrikciós enzimek alkalmazásával készített restrikciós fragmenseket, valamint ezeknek a fragmenseknek a relatív méreteit és kölcsönös elhelyezkedését. 35 A 8. táblázat sorolja fel ezeknek a fragmenseknek a méretét, a vektorok nevét, a rekombináns plazmidok nevét, és alkalmazásukat a nukleinsav-fragmensek sorozatában. A 17. ábrában mutatjuk be a nuklein- 40 sav-fragmensek sorozatát, amely akkor képződik, amikor a 8. táblázatban felsorolt fragmenseket alkalmazzuk. 8. Táblázat Fragmens Méret Vektor Rekombináns plazmid Alkalmazás ai HindlII-PstI 2,0kb M13mp10 mKTHl355 Szűrő ai HindlII-PstI 2,0kb M13mp11 mKTHl356 Szűrő a2 Pstl-HindlII 1,2kb M13mp10 mKTHl357 Szűrő a2 Pstl-lIindlII 1,2kb M13mp11 mKTHl358 Szűrő bi Pstl-PstI 5,7kb pBR322 PKTH1352 Jelzett vizsgáló minta b.) Herpes simplex vírus 1. típusból kapott nukleinsav-reagensek sorozata érzékenységének bemutatása szendvics-hibridizációs módszerrel A nukleinsav-reagensek sorozatának érzékenységét az egyedi folyamatos reagenspárokkal összehasonlítva tanulmányozzuk szendvics-hibridizálási módszerrel. A vizsgálathoz alkalmazott minta a HSV1 DNS, amelyet egyszálúvá teszünk és semle- 60 gesitünk, hasonlóan, mint az lb. példában leírt mintánál. A HSVl-hez tartozó vizsgálatot olyan szűrők alkalmazásával hajtjuk végre, amelyek 10" molekulát tartalmaznak mKTH1364, mKTH1365 DNS-ból (a,), és 65 mKTH1366, mKTH1367 DNS-ből (a2), vala-12
