194938. lajstromszámú szabadalom • Eljárás javított nukleinsav-reagensek előállítására
194938 23 24 mint 32P-vel jelzett b,, b2 és b3 vizsgáló mini.b. példában leírtak szerint hajtjuk végre, tákból. A jelzett vizsgáló minták 108—108 cprp/ Az eredményeket a 9. táblázatban mutatjuk be. /g DNS-t tartalmaznak. A hibridizálást az 9. Táblázat Minta Hibridizált radioaktivitás (b)-vel, mint Molekula/ vizsgáló mintával vizsgalat bi b2 b3 bi, b2, b3 0 13 12 10 27 106 28 30 26 135 5 -10 6 62 60 65 430 109 2100 2035 2210 9560 bi 250000 cpm/vizsgálat bz 250000 cpm/vizsgálat h 3 250000 cpm/vizsgálat bi ,b2,b3 750000 cpm/vizsgálat cpm= beütés/perc A pozitivitás alsó határa 30 cpm, amikor a vizsgáló minta b,, vagy b2, vagy b3, és 60 cpm, amikor a vizsgáló minta bt, b2, b3. Az eredmények azt mutatják, hogy a nukleinsav-reagensek sorozata ötször olyan érzékeny, mint az egyedi nukleinsavak. c.) Herpes simplex diagnosztikumok nukleinsav-reagensek sorozatával végzett szendvics-hibridizálást alkalmazva Az érzékenységi vizsgálatokon kívül a HSVl-hez és HSV2-höz tartozó nukleinsav-reagensek sorozatának fajlagosságát is megvizsgáljuk, egy vizsgálatban egyesítve a két szűrőt — amelyek egyike HSVl-re, másika HSV2-re fajlagos — a jelzett vizsgáló mintákkal együtt. A 10. táblázat mutatja be a HSV tipizáló készlet ‘fajlagosságát. 10. Táblázat Minta HSV1 Szűrő (cpm) HSV2 Vak HSV1 DNS 107 molekula 569 98 27 108 molekula 3621 503 HSV2 DNS 107 molekula 78 353 31 108 molekula 356 1741 pKTHl359 108 molekula 3313 59 pKTH1351 109 molekula 130 13510 Klinikai 10. Táblázat (folytatás) Minta Szűrő (cpm) HSV1 HSV2 Vak 1. minta 5903 726 Klinikai 2. minta 344 2638 A 10. táblázat eredményei azt mutatják, 40 hogy a HSV1 és HSV2 tipizálását egyértelműen el lehet végezni a klinikai mintákból. 4. példa a ) Nukleinsav-reagensek sorozata humán 11. papillomavírusból és ezek készítése 45 pBR322 plazmidban, a BamHI helyben klónozott, 7,9 kb-s humán 11. papillomavirus (HPV11) DNS-t emésztünk BamHI és PstI restrikciós enzimekkel, és a frakciókat elkülönítjük és izoláljuk ismert módszerekkel. 50 A kiónt a German Cancer Research Center-tői (Német Rákkutató Központ), Heidelbergből, di. Gissman Lutz-tól kapjuk. A 18. ábra mutatja be az előállított fragmensek relatív méretét és kölcsönös elhelyez- 55 kedését. A szubklónozást ismert technikákkal hajtjuk végre, vektorként pBR322 plazmidot vagy M13mpl0 és M13mpll fágokat alkalmazva. All. táblázat felsorolja a szóban forgó fraggQ mensek méretét, a szubklónozáshoz alkalmazott vektorokat, a rekombináns plazmidok nevét és ezek felhasználását. A 19. ábra mutatja be a nukleinsav-reagensek sorozatát, amely akkor alakul ki, amikor a 11. táblázatban felsorolt fragmenseket al- 65 kr Imazzunk. 13
