194914. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vankomicin-só előállítására
194914 2 A találmány tárgya eljárás vankomicin-diíoszfát izolálására vizes oldatából, és kívánt esetben ebből történő hidrokloridsó előállítására. A vankomicin glikopeptid típusú antibiotikum, amelyet Indonéziából és Indiából származó földmintából izolált mikroorganizmus, a Nocardia orientalis fermentációjával állítunk elő (a mikroorganizmust előzőleg Streptomyces orientalis-nak nevezték). A fermentációból származó legtöbb antibiotikumhoz hasonlóan a vankomicin is több közel rokon és kémiailag hasonló vegyületből álló, több komponensű komplex. A komplex izolálását a 3 067 099 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban részletesen megadják. A vankomicint elsősorban baktériumellenes szerként használják, hatásos azonban a kérődzők takarmány-hasznosításának fokozására is. [lásd a 3 816 618 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást.] A kereskedelmi forgalomban levő vankomicin előállítása több lépésből álló eljárással történik, ebbe a folyamatba tartozik a fermentáció és az izolálásí és tisztítási lépések. A fermentlevet általában, a szilárd halmazállapotú anyagok és a micélium eltávolítására szűrik, az oldódó antibiotikumot tartalmazó szürletet keresztkötésekkel rendelkező kation-cserélő oszlopon át vezetik, ez megköti az antibiotikumot. Az oszlopról lejövő eluátum tartalmazza a vankomicint, az oldatot aktívszénnel kezelik a színanyagok eltávolítására, majd ezt követően az oldódó vankomicint oldhatatlan réz-komplexként izolálják. A rézkomplexet végül savas körülmények között hidrogén-szulfiddal kezelik a vankomicin oldására, amit azután az oldat pH-j ának megfelelő beállításával szabad bázisként izolálhatunk. A szabad bázist állatoknak orálisan adagolható készítményekként használják, használható közvetlenül, vagy valamilyen származékként, például injektálható hidroklorid sóként. A vankomicin ismert előállítása több hátránnyal rendelkezik. Az izolálási folyamatban a réz-sók felhasználása azzal jár, hogy a réz-komplex eltávolítására hidrogén-szulfidot kell használnunk, ekkor ugyanis a réz oldódó sói oldhatatlan szulfidként kiválnak. Ez azt eredményezi, hogy a vankomicin termék esetenként intenzív szagú és színes. A több lépésből álló izolálási és tisztítási eljárás során minden lépésben termékveszteség következik be, így a vankomicin szabad bázisra számított teljes kitermelés csak 30%-os. A jelen eljárás kristályos vankomicin-só előállítását teszi lehetővé, ez a só kristályos, és viszonylag nyers vankomicint tartalmazó vizes oldatokból, például fermentléből a vankomicin-só közvetlenül izolálható. Vankomicin-sókat ezideig kristályos alakban nem állítottak elő. A találmány szerinti új, kristályos alak hosszú időn át stabil, és közvetlenül felhasználható gyógyszerészeti készítményekben. A jelen leírás szerinti eljárás egy tovább- 2 1 fejlesztett vankomicin izolálási eljárás, nincs szükség a vankomicin réz-komplexének előállítására, növekszik a kitermelés, és általa olyan termékhez jutunk, amely jobb gyógyszerészeti tulajdonságokkal rendelkezik. A találmány szerinti eljárással előállított új, kristályos készítmény a vankomicin difoszfát sója. A vegyület a vankomicin savas, vizes oldatából izolálható, általában hidráiként létezik. A hidratáció mértéke a szárítás hatékonyságától függ, közönségesen azonban 0—10 mól vizet tartalmaz a só. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös terméke a kristályos vankomicin difoszfát-dekahidrát. A találmány szerinti eljárással előállított vankomicin-difoszfát rendkívül jól kristályosodó anyag, igen kedvező stabilitási tulajdonságokkal rendelkezik. A találmány szerinti hidratált vegyület az alábbi Röntgen-diffrakciós képpel rendelkezik, a mérést 114,6 mm-es Debye-Scherrer kamerával végezve (nikkel-szűrő, 1,5418 Â réz-sugárzás): Térköz, d Relatív intenzitás, I/Ij 16,52 1,00 12,36 0,30 10,28 0,50 8,98 0,75 7,97 0,50 7,41 0,20 6,76 0,20 6 ,'24 0,20 5,61 0,50 5,34 0,50 4,96 0,40 4,73 0,20 4,44 0,50 4,26 0,50 3,98 0,40 3,75 0,40 3,55 0,50 3,35 0,30 3,15 IG 3,01 IG 2,81 IG 2,66 IG Megj egyzés: IG = igen gyenge. A vankomicin-só izolálására és tisztítására a jelen leírás s zerinti eljárás értelmében úgy járunk el, hogy a vizes oldatban, például férmentiében levő vankomicint difoszfát-sójává alakítjuk, és a sót szűréssel elkülönítjük. Részletesebben úgy járunk el, hogy a vankomicint tartalmazó fermentlevet 8,0 és 10,0 közötti pH-n szűrjük. A szilárd halmazállapotú szennyezőanyagok és a fermentáció során képződő micélium elkülönülésének elősegítésére az ismert diatoma szűrési segédanyagot, Celitet (Johns Manville, Inc.) adagoljuk a fermentléhez. A szürletet ezután ioncserélő oszlopon, például Ionac X-236 gyantával töltött oszlopon át vezetjük. Ez a gyanta kevés keresztkötést tartalmazó polisztirol-divinil-benzol alapú, nátrium-alakú kationcse-5 10 15 20 25 3C 35 40 45 50 55 60 65
