194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194913 A példa sorszáma A vegyület neve 15 R® Termelés 16 5. [Aa6, Trp7, Leu*] -gonadoliberin 0,57 35% 6. [MabÄ, Phe7, Gln^J-gonadoliberin 0,63 43% Az 5.-6. példák szerinti vegyületek aminosavanalízisét az alábbi táblázatban adjuk meg: A példa Ser Glu Pro Gly Leu Tyr Phe His Trp Aa/Mab sorszáma 5. 0,91 1,02 0,97 1,00 0,98 1,03 - 0,93 1,82 0,90 6. 0,93 2,02 1,12 1,00 - 0,97 1,07 0,95 0,87 0,89 7. példa Injekció elkészítése intramuszkuláris, szubkután vagy intravénás beadás céljára: a) Az (I) általános képletű gonadoliberin-származékot 1-10 mg/ml töménységben desz- 25 tilIáit vízben, fiziológiás sóoldatban vagy pufferolt vizes oldatban oldjuk. Az oldatot sterilre szűrjük, majd 50-500 pg anyagot tartalmazó térfogatokat ampullákba töltünk, lioíilizálunk, és végül az ampullákat lezárjuk, Az ampullák anyagtartalmát kezelés előtt 1-10 ml desztillált víz hozzáadásával frissen oldjuk, és a szükséges dózisnak megfelelő térfogatokat injektáljuk. b) Az (I) általános képletű gonadoliberin- 35 -származékot 20-500 pg/ml töménységben tartalmazó, megfelelő fiziológiás sóoldatot, illetőleg benzilalkoholt ampullákba töltjük, és az ampullákat lezárjuk. Az így kapott oldatok közvetlenül alkalmasak injektálásra. 40 8. példa Follikulus stimuláció megvalósítása infantilis nőstény patkányokon 40 db 21 életnapos, 7-8 g súlyú infantilis nőstény patkányt fiziológiás sóoldatban oldott antranilsav(6)GnRH analóggal kezeltünk intraperitoneálisan. A 3-5 napig tartó kezeléssorozat alatt naponta 1-2 alkalommal 1 pg-os (priming) dózisokat alkalmaztunk, 50 majd a kezelés utolsó napján 5-10 (resolving) adagot adtunk. A kezelés utolsó piming adagja és a resolving adag között 6 órás időintervallumot alkalmaztunk. A kezeletlen kontroll fiziológiás sóoldntot kapott intraperitoneáli- 55 san. A kezelések befejezése után valamennyi állatot étergőzben tulaltattuk; majd petefészkeiket kipreparáítuk. Valamennyi kísérleti állatot 24 órával az utolsó kezelést követően ^ boncoltuk fel. A petefészek állapotának kiértékelését frissen vizuálisan és mikroszkóposán, majd szövettani minták készítését követően ismételten mikroszkóposán végeztük. Megállapítottuk, hogy a kontroll infantilis patkányok petefészkein néhány fejlődő tű- 65 sző található, ezek között sem curpus hemoragicum, sem corpus luteum nem volt. A petefészkek mat^sárga színűek, kis méretűek voltak. Ezzel szemben valamennyi kezelt csoportban már a vizuális értékelés hormonhatást igazolt, amely intenzív tűszőnövekedésben, a tüszők Gráf-tüszővé alakulásában, a nagytüszők ovulációjában és szabályos sárgatest kialakulásában nyilvánult meg. A petevezetők és az uterus méretben és súlyban is jelentősen növekedtek a kontrolihoz képest. A hormonnal kezelt 35 db infantilis patkányból öszszesen 4 db nem reagált a kezelésre. A naponta 1 pg antranilsav(6)GnRH ana'ógot kapó csoport a 4. napi kezelés után az njektálást követő 6 órával 5 pg resolving ant■anílsav(6)GnRH adagot kapott. Valamennyi kezelt állatnál a petefészek hiperstimulációja jól látható volt. A kétoldali petefészkeken 7- 25 db corpus luteumot lehetett megszámo'ní. A vizuális képet a szövettani kép egyértelműen igazolta. A szövettan vizuálisan nem látható, nagy mennyiségű intrafakollikuláris luteinizációt is feltárt. Valamennyi kísérleti állatnál egyértelmű uterus-növekedést is tapasztaltunk, a kezelt állatok uterusa kb. 2-szerese volt a kezeletlen kontroliénak. A fentiekhez hasonlóan (különböző dózisokkal és időintervallumokkal) kezelt kísérleti állatoknál a corpus luteumok száma 2 és 40 között változott, jellemzően 12-25 volt. Vizuális értékelésünket a szövettani vizsgálat igazolta. A fenti eljárás igazolja, hogy az állatfajrak már infantilis egyedeiben megvalósítottuk a follikulogenézis stimulációját. A follikulusok fejlődése fiziológiás volt, amit a Gráf-tüszővé növekedés, az ovuláció és a normális luteinizáció bizonyított. 9. példa Nyugalmi állapotban lévő kecsege hímek spermatogenézisének stimulálása antranilsav (6)Gln (8)GnRH analóggal 5 db 4°C-os vízben betelelt (átteleltett) kecsege hímet laboratóriumi körülmények 9
