194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194913 4 glicin-amid csoportot 1-4 szénatomos alkil-amid csoportra cseréljük ki. Végül a találmány alapja az a felismerés, hogy a gonadoliberin 8-as, vagy 7-es és 8-as helyzetű aminosavainak bizonyos aminosavakra való cseréjével olyan gonadoliberin-származékok állíthatók elő, amelyek emlősök mellett más fajok szaporítására is alkalmasak. A fentiek alapján a találmány eljárás az (I) általános képletü Glp-His-Trp-Ser-Tyr-X,-X2-X3-Pro-X4 (I) — amely képletben X,, X2, X3 és X4 jelentése a fenti — nonapeptid etil-amid, illetve dekapeptid-amid és e vegyületek sóinak áz előállítására. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a) a lépésenként és a fragmens kondenzáció megfelelő kombinációt alkalmazva a védett aminosavakat kondenzáljuk, és a védőcsoportokat eltávolítjuk, vagy b) a szilárd fázisú peptidszintézis módszerét alkalmazva valamely szilárd hordozóra a megfelelő sorrendben lépésenként kondenzáljuk a védett aminosavakat karbodiimides vagy aktív észteres kapcsolással, és a végterméket savas vagy lúgos hasítással távol ltjuk el a szilárd hordozóról, és a védőcsoportokat a gyantáról való lehasítással egyidejűleg vagy azt megelőzően vagy követően távolítjuk el. Az a) eljárás szerinti kombinációk közül az alábbi különösen előnyös: valamely (II) képletü Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Ng (II) pentapeptid-azidot valamely (III) általános képletü X,-X2-X3-Pro-X4 (III) — amely képletben X,, X2, X3 és X4 jelentése a fenti — tetra- vagy pentapeptiddel kondenzálunk. Ab) eljárás szerinti eljárásnál szilárd hordozóként benzhidril-amin gyantát vagy klór-metilezett polisztirol gyantát célszerű használni. A védőcsoportokat tartalmazó végterméket hidrogén-fluoridos hasítással és/vagy etil-ammonolízissel előnyös eltávolítani a gyantáról. A képződött nona-, illetve dekapeptid-amidot kívánt esetben gyógyászatilag elfogadható savval reagáltatva savaddíciós sóvá alakítjuk, vagy kívánt esetben a savaddíciós sóból bázissal reagáltatva felszabadítjuk a szabad bázist. A találmány tárgya továbbá eljárás az (I) általános képletü vegyületek átalakítására gyógyászati és/vagy szaporodásbiológiai célokra alkalmas kompozíciókká. Ezt az eljárást úgy végezzük, hogy valamely (I) általános képletü vegyületet vagy annak savaddíciós sóját a szokásos hordozó és/vagy vívőanyagokkal összekeverve gyógyászati és/vagy szaporodásbiológiai célokra alkalmas készítménnyé alakítjuk. Az (I) általános képletü gonadoliberin-származékok szarvasmarhák esetén intra-3 muszkuláris, szubkután vagy intravénás injekcióban 5-200 pg dózistartományban, halak esetében 0,1-100 pg dózistartományban hatékonyak intramuszkuláris vagy szubkután injekcióval adagolva. A találmány szerinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. A vékonyréteg kromatográfiás (TLC) R/ értékeket Kieselgel (DC Alufolien, Merck) lemezeken az alábbi oldószerelegyekben határoztuk meg: 1. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz 30:20:6:11 2. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz 60:20:6:11 3. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz 120:20:6:11 4. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz 240:20:6:1 1 5. n-Butanol-ecetsav-víz-etilacetát 1: 1:1 : 1 6. n-Butanol-ecetsav-víz 4:1:1 7. i-Propanol-1 mólos ecetsav 2:1 8. Etilacetát-piridin-ecetsav-víz 5: 5:1: 3 9. Acefon-toluol 1:1 10. Kloroform-ecetsav 24:2 11. Metil-etilketon-piridin-víz 65:15:20 12. Kloroform-metanol-ecetsav 85:10:5 13. n-Butanol-jégecet-ammónia (1 térfogat tömény ammóniumhidroxid -f 4 térfogat v í z ) - v í z 6: 1:1 :2 1. példa [Aa6, Gin8, desGly10]-gonadoliberin etil-amid előállítása a) Boc-His(DNP)-Trp-OMe Molekulasúly: 622,62 21,12 g (50 mmol) Boc-His(DNP)-OH-t feloldunk 100 ml dimetil-formamidban, majd 0°C-ra hűtjük. Keverés közben hozzáadunk 10,32 g (50 mmol) diciklohexil-karbodiimidet és 7,66 g (50 mmol) N-hidroxi-benztriazolt. Az elegyet 10 percig 0°C-on keverjük, majd a kivált diciklohexil-karbamidot kiszűrjük. 12,74 g (50 mmol) H-Trp-OMe.HCl-ot feloldunk 70 ml dimetil-formamidban, és az oldatot 0°C-ra hűtjük. Hozzáadunk 6,94 ml (50 mmol) trietil-amint, majd 5 perc keverés után trietil-amin-hidrokloridot kiszűrjük. A két oldatot egyesítjük, és éjszakán át 0°C-on keverjük. Másnap a kivált DCU-t kiszűrjük, és az oldatot szárazra bepároljuk. \ kapott olajat 500 ml etil-acetátban feloldjuk, és háromszor 100 ml jéghideg 1 mol-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, majd ötször 100 ml telített nátrium-hidrogén-karbonát oldattal, végül kétszer 100 ml 10%-os nátrium-klorid oldattal kirázzuk. A szerves fázist vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük és szárazra bepároljuk. A kapott olajos anyagot petroléterrel elporítjuk, szűrjük és szárítjuk. Az így kapott kristályos anyag, etil-acetátból petroléterrel átkristályosítható. 'Termelés: 27,70 g (89%) Op.;119-122°C [a]*2= + 14,l° (c=l, DMF) Rf4=0,62; R8=0,41 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
