194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
5 194913 6 b) H-His(DNP)-Trp-0Me.2HCI Molekulasúly: 522,49 (szabad bázis); 595,41 (.2HC1) 24,9 g (40 mmol) Boc-His (DNP)-Trp-OMe dipeptidet feloldunk 100 ml metanolban, és hozzáadunk 100 ml 4 n metanolos sósav-oldatot. Az elegyet 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, mialatt a dipeptidészter-hidroklorid kikristályosodik. Ezt kiszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. Termelés: 21,91 g (92%) Op.: 198-202°C [a]22=0,49° ,(c=l, DMF) R|=0,46; Rí 0,18 c) Glp-His-(DNP)-Trip-OMe Molekulasúly: 633,60 4,85 g (36,8 mmol) L-piroglutaminsavat, 7,58 g diciklohexil-karbodiimidet és 5,63 g N-hidroxi-benztriazolt feloldunk 100 ml dimetil-formamidban. Az elegyet 10 percig 5-10°C-on keverjük, majd a kivált DCU-t kiszűrjük. 20.84 g (35 mmol) H-His(DNP)-Trp-OMe. 2HCl-t feloldunk 100 ml dimetil-formamidban, és az oldathoz hozzáadunk 9,72 ml (70 mmol) trietil-amint. 5 perc keverés után a kivált trietil-amin-hidrokloridot kiszűrjük. A két oldatot egyesítjük,és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap az elegyhez 90 ml acetont adunk, és a kiváló oldhatatlan anyagot kiszűrjük. Az oldat bepárlásával olajos anyagot kapunk; ezt etil-acetáttal eldörzsöljük, szűrjük, majd szárítjuk. A száraz kristályos anyagot háromszor 25 ml vízzel mossuk és ismét szárítjuk. Az anyag etil-acetátból forrón oldva, majd lehűtve átkristályosítható. Termelés: 18,42 g (83,1%) Op. 148-151°C [a] £3=+5,2° (c=l, DMF) Rf=0,53; Rí=0,38 d) GIp-His-Trp-OMe Molekulasúly: 466,50 15.84 g (25 mmol) Glp-His(DNP)-Trp-OMe védett tripeptidet feloldunk 100 ml dimetil-formamid és 40 ml víz elegyében. Hozzáadunk 4 ml merkapto-etanolt, majd az oldat pH-ját trietil-aminnal 8-ra állítjuk. 30 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. Az olajos anyagot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és szárítjuk. A kapott anyagot kevés metanolban oldjuk, és éter hozzáadásával átkristályosítjuk. A kivált kristályokat szűrjük, majd szárítjuk. Termelés: 10,92 g (93,6%) Op. 228-232°C [a]22=+4,04° (c=0,42, DMF) Rf2=0,30 e) Glp-His-Trp-N2H3 Molekulasúly: 466,51 9,33 g (20 mmol) Glp-His-Trp-OMe tripeptidet feloldunk 250 ml metanolban. Hozzáadunk 20 ml 98%-os hidrazin-hidrátot. A reakcióelegyet 3 órán át 40°C-on, majd éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Másnap a kivált anyagot szűrjük, majd hideg metanollal mossuk és szárítjuk. Termelés: 7,58 g (81,2%) Op. 166- 169°C [a]2D2=- 22,3° (c=0,5, DMF) Rj=0,50; R£=0,14 f) Gip-His-Trp-Ser-Tyr-OMe Molekulasúly: 716,8 7,0 g (15 mmol) Glp-His-Trp-N2H3-ot (a példa e) lépésének terméke) feloldunk 60 ml DMF-ben. Az oldatot 0°C-ra hűtjük, majd keverés közben hozzáadunk 7,5 ml (45 mmol) 6 n sósav oldatot. Ezután lassan az elegybe csepegtetjük 1,035 g (15 mmol) nátrium-nitrit tömény vizes oldatát, és további 15 percig 0°C- on keverjük, majd a reakcióelegyhez adjuk 4,78 g (15 mmol) H-Ser-Tyr-OMe.HCl 15 ml DMF-ben készült oldatát. 6,25 ml (45 mmol) trietil-aminnal) az elegy pH-ját semlegesre állítjuk. Az elegyet éjszakán át 0-4°C-on keverjük, másnap vákuumban szárazra pároljuk, és az olajos anyagot éterrel eldörzsöljük. A kapott porított anyag súlya 12,1 g (100%); két kismennyiségű, szennyező foltot tartalmaz, azonban tisztítás nélkül hidraziddá alakítható, amely jól kristályosodik. Metanolból átkristályosított ellenőrző anyag fizikai állandói: Op. 188-190°C [a]22= -3,48° (c=l, DMF) Rí=0,58; Rf=0,26 g) Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 Molekulasúly: 716,8 12 g nyers, porított Glp-His-Trp-Ser-Tyr- OMe pentapeptid-észtert feloldunk 200 ml metanolban, hozzáadunk 10 ml 98%-os hidrazin-hidrátot, és az elegyet 3 órán át 40°C-on keverjük. Az elegyet éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált kristályokat kiszűrjük, és exszikkátorban tömény kénsav fölött szárítjuk. A szárított7kristályos anyagot 250 ml 0,5 n sósavoldatban oldjuk, majd telített nátrium-karbonát oldattal pH 8-ra semlegesítjük, és 2 órán át 0°C-on állni hagyjuk. A kivált kristályokat szűrjük, jéghideg vízzel mossuk és szárítjuk. Termelés: 6,12 g (a két lépésre vonatkoztatva 56,9%) Op. 205-206°C [ct]22=21,51° (c=l, DMF) Rf=0,39; R|=0,14 Hidrazin-nitrogén: talált: 3,79%, 3,76% elméleti: 3,91% h) H-GIn-Pro-NHEt.TFA Molekulasúly: 367,3 (Boc: 370,49) 10 g (70mmól)prolin-etil-amidot(72mmól) Z.-Pro-NHEt-ből hidrogénezéssel) feloldunk 100 ml dimetil-formamidban, és a pH-t trietil-aminnal 8-ra állítjuk. Ezután keverés közben hozzáadjuk 32 g (87 mmol) Boc-Gln-ONP 100 ml dimetil-formamidban készült oldatát. 5 1° 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
