194913. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 6-os helyzetben aromás amino-karbonsavat tartalmazó új gonadoliberin-származékok és e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
194913 2 1 A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű, új Glp-His-Trp-Ser-Tyr-XrX2-X3-Pro-X4 (I) — amely képletben X, jelentése orto-amino-benzoesav- vagy meta-amino-benzoesav csoport, X2 jelentése leucil-, triptoíil- vagy fenilalanilcsoport, X3 jelentése arginil-, leucil- vagy glutaminilcsoport, X4 jelentése glicil-amid- vagy etil-amid-csoport — nonapeptid etil-amid, illetőleg dekapeptid-ainid, valamint e vegyületek sóinak az előállítására A képletekben alkalmazott rövidítések megegyeznek a peptidkémiában elfogadott nomenklatúrával, amelyet például a J. Bioi. Chem. ismertet (241,527 (1966)). Ennek megfelelően a leírásban előforduló rövidítések jelentése a következő: Glp: piroglutaminsav His: hisztidin Trp: triptofán Ser: szerin Tyr: tirozin Gly: glicin Phe: fenil-alanin Leu: leucin Pro: prolin Glu: glutaminsav Gin: glutamin Arg: arginin Mab: Aa: Boc: Bzl:-x-(piroglutamil) (hisztidil) (triptofil) (szeril) (tirozil) (glicil) (fenil-alanil) (leucil) (prolii) (glutamil) (glutaminil) (arginil) m-amino-benzoesav antranilsav terc.-butil-oxi-karbonil benzil DCC: diciklohexil-karbodiimid DCU: diciklohexil-karbamid DIC: diizopropil-karbodiimid DMF: dimetil-formamid DNP: dinitro-fenil EA: etil-amid Et: etil HPLC: nagynyomású folyadék-kromatográfia Me: metil ONP: p-nitro-fenil OPCP: pentaklór-fenil TEA: trietil-amin TFA: trifluor-ecetsav THF: tetrahidro-furán TLC: vékonyréteg-kromatográfia Tos: tozil UV: ultraibolya Z: benzil-oxi-karbonil A gonadoliberin (Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, a szakirodalomban ismert egyéb nevei: gonadotropin releasing hormon, GnRH, luteinizáló és follikulusz-stimuláló hormont felszabadító hormon LH/FSH-RH) és e hormon ismert származékainak általános tulajdonsága, hogy képesek a luteinizáló és a follikusz-stimuláló hormonok (LH és FSH) felszabadítására. 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 A 80-as évek elején vált ismertté, hogy bizonyos halakban és madarakban a gonadoliberin szerkezete eltér az emlősökben található gonadoliberin szerkezetétől (J. A. King és R. P. Millar, J. Bioi. Chem. 257, 10722-28 (1982); South-African Journal of Science 78, 124 (1982); N- Sherwood et al., Proc.Natl.Acad. Sei. 80, 2794-2798 (1983)). Ezek az eltérések madarak esetében a 8. halak esetében a 7., illetve a 8. helyzetben lévő aminosavakat érintik. Az irodalomból az is ismeretes, hogy azok a gonadoliberin-származékok, amelyek a 6-os helyzetű glicin helyett hidrofób alifás- vagy aromás oldalláncú D-aminosavakat tartalmaznak, a gonadoliberinhez viszonyítva megnövekedett hatást mutatnak (J. Sandow et al., Control of Ovulation, Butterworth, London, 1978, pp. 49-70; A. V. Schally, D. H. Coy, C. A. Meyers, Annu. Rev. Biochem. 47, 89-128 (1978)). Ismeretes továbbá, hogy a 10-es helyzetben lévő glicin-amid csoportot alifás szénláncú amidcsoportokkal helyettesítve a gonadoliberin biológiai hatása tovább fokozható (M. Fujinoetal., J.Med. Chem. 16, 1144-1147 (1973) Momany (F. A. Momany J. Amer. Chem. Soc. 98, 2990-2996 (1976) és J. Amer. Chem. Sqc.98,2996-3000( 1976) ) a dekapeptid különböző lehetséges konformációinak energiatartalmát vizsgálva bebizonyította, hogy a legalacsonyabb energiatartalmat olyan térbeli elrendeződés képviseli, amelyben a 6-os helyzetű glicinnél vagy D-alaninnál a molekula „U" alakban meghajlik (ß-turn). Előállítottak olyan GnRH-származékot [(IV) képlet] (R. M. Freidinger, D. F. Veber, P. D. Schwenk, J. R. Brooks, R. Saperstein, Science 210, 656-658 (1980)), amelyben ezt a térszerkezetet rögzítették a 6-os helyzetű glicinnek’ y-laktámmal történő helyettesítésével. A vegyület biológiai aktivitása a natív gonadoliberinéhez viszonyítva megnövekedett. A találmány célja olyan új gonadoliberin-származékok előállítása, amelyek az ismert vegyületeknél kedvezőbb biológiai hatékonyságot mutatnak, és emlősök mellett más fajok, pl. halak, kétéltűek stb. szaporítására is alkalmasak. A találmány további célja olyan eljárás kidolgozása, amelynek során a 6-os helyzetű glicin helyére olyan új típusú aminosavat építünk be, amely a legelőnyösebb térszerkezet rögzítése mellett a biológiai hatást növelő aromás gyűrűt is tartalmazza, ugyanakkor a racemáció veszélye nem áll fenn. A találmány alapja az a felismerés, hogy a fenti cél elérhető, ha a gonadoliberin 6-os helyzetű glicincsoportja helyére orto-amino-benzoesavat (antranilsav) [(V) képlet] vagy meta-amino-benzoesavat [(VI) képlet] építünk be. A találmány további alapja az a felismerés, hogy az ilyen gonadoliberin-származékok hatása még tovább növelhető, ha a 10-es helyzetű
