194853. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 4-(2-hidroxietil)-szubsztituált-5-hidroxi-3,4-dihidro-2H-benzopirán származékok és a vegyeleteket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
194853 7 8 gást jegyeztünk fel a legközelebbi 0,5 másodperctől kezdve másodpercenként. Egy oldószerkontrollt és szabvány hatás vizsgálatot végeztünk a screanelóssel egyidejűleg. Ha a teszt vegyület határa nem tért vissza a 2 órás teszt időpontban az alap értékekhez, 4 és 6 óra múlva meghatároztuk a válasz lappangásokat. Az utolsó mérést 24 óra múlva végeztük, ha a hatást még észleltük a teszt nap végén. Kémiai fájdalomérző ingereken alapuló teszt A fenil-benzokinon irritációval kiváltott rángás elnyomása 5 Carworth Farms CF-1 egérből álló csoportokat szubkután vagy orálisan előkezelünk sóoldattal, morfinnal, koderinnel vagy a tesztvegyülettel. 20 perccel (szubkután kezelés után) vagy 50 perccel (ha a kezelés orálisan történt) később minden csoportot beoltunk intraperitoneálisan fenil-benzokinonnal, egy ismert hasgörcsöt kiváltó szerrel 5 percen át. Megfigyeltük, hogy 5 perccel az injekció után ránganake az egerek. Meghatároztuk a rángások gátlását a gyógyszeres előkezelések hatására: MPE50. Nyomással kiváltott fájdalomérző ingereken alapuló teszt A Haffner farok szorító módszer hatása Haffner, Experimentelle Prüfung Schmerzetillender Mitt Deutsch. Med Wschr. 55, 731-732 (1929) módosított eljárását használtuk, hogy megállapítsuk a tesztvegyület hatását a farok szorító ingerrel kiváltott agresszív támadó reakciókra. 50-60 g súlyú hímnemü albino patká nyokat használtunk a Charles River (Sprague-Dawley) CD törzsből A gyógyszerkezelés előtt és 0,5, 1, 2 és 3 órával a kezelés után egy fokú Hopkins 6,25 cm-es „bulldog” csipeszt csiptettünk a patkány farkának ideggyökerére. A kísérlet vége világos támadó és harapó viselkedés az inger irányában és a támadás lappangását már másodpercek múlva jegyeztük. A csipeszt 30 másodperc múlva eltávolítjuk, ha még támadás nem lépett fel és a válasz lappangását. 30 másodpercként jegyeztük fel. A morfin hatása 17,8 mg/kg (i.p.). Elektromos fájdalomérző ingereket alkalmazó teszt Rándulás ugrás teszt A Tenen, Psychopharmacologie, 12, 278- -285 (1968) rándulás ugrási módszer módosított változatát használtuk a fájdalom küszöbök meghatározására. 175-200 g-os Charles River (Sprague-Dawley) CD törzsű hímnemű albino patkányokat használtuk. A gyógyszeradagolás előtt mindegyik patkány lábát 20%-os glicerin-sóoldatba merítettük. Az állatokat ezután egy kamrába helyeztük és így 1 másodperces sokkot alkalmaztunk az állatok lábánál egy sorozatban és a sokkok intenzitását 30 másodpercenként növeltük. Az intenzitások: 0,26; 0,39; 0,52; 1,05; 1,31; 1,58; 1,86; 2,13; 2,42; 2,72 és 3,04 mA. Az állatok viselkedését kiértékeltük a) rándulás, b) nyikkanás, c) ugrás vagy gyors mozgás előre kategóriák alapján a sokk kezdetén. Egyetlen növekvő intenzitású sokk sorozatot alkalmaztunk az egyes patkányoknál a gyógyszerkezelós előtt és 0,5; 2,4 és 24 órával a gyógyszerkezelós után. 5 A teszteredményeket a maximális lehetséges hatás %-ában fejeztük ki: MPE%. Az egyes csoportok MPE%-át statisztikusan vetettük össze a standart MPE%-val és gyógyszer előtti kontroll értékekkel. Az MPE% kiszámítása a kö- 10 vetkezőképpen törtógt: MPE%= 'eszX[($ :.j?ntr°" x 100 kikapcsolasi idő - kontroll idő Mint említettük a találmány szerint előállított vegyületek különösen hasznos hányás és szé- 15 dülés ellenes szerek emlősöknél. Különösen hasznosak a neoplasztikus szerek által kiváltott hányás és szédülés ellen. Az (I) általános képletű vegyületek antiemetikus tulajdonságait nem érzéstelenített, nem 20 megfékezett macskákon határoztuk meg Proc. Soc. Expt. I. Bioi. és Med. 160, 437-440 (1979) módszere szerint. Prosztaglandin E2 hasmenés antagonizmus egéren 25 A találmány szerinti vegyületek hasmenés elleni hatását Dajani és társai European Jour. Pharmacol. 34,108-113 (1975) módosított módszerével határoztuk meg. A módszer megbízhatóan idéz elő hasmenést egyébként kezelet- 30 len egereken 15 percen belül. Előkezelt állatokat, melyeknél nem lép fel hasmenés, védettnek tekintünk, a tesztvegyület hatására. A tesztvegyület által kiváltott székrekedést előidéző hatást „minden vagy semmi” válaszként mér- 35 jük. A hasmenést vizes formátlan székletként definiáljuk, amely igen különbözik a normális széklettől, amely jól formált szilárd és viszonylag száraz darabokból áll. Charles River CD-I törzsű hímnemű albino 40 egereket használtunk. Csoport ketrecekben tartotiuk az állatokat és az érkezést követő 1 héten belül vizsgáltuk őket. A teszt-állatok súlya 20-25 g. A pelletait patkány eledel ad libitum állt rendelkezésre a teszt előtt 18 órával, 45 akkor megvontuk a táplálékot. Az állatokat megmértük és azonosítási jellel lát’uk el. Minden kezelési csoportban 5 állatot használtunk. 20-25 g-os egereket helyeztünk a csoport ketrecekbe és a tesztelés előtt 50 éjjel éheztettük az állatokat. Víz ad libitum rendelkezésre állt. Az állatokat a gyógyszer kezelés után egy órával 0,32 mg/kg i.p. PGE2-val ingereltük 5% etanolban, majd azonnal 15x 15x 18 cm-es átlátszó akril dobozokba helyzetük 55 egyenként az állatokat. Egy eldobható papírkarton lapot helyeztünk a dobozok aljára a hasmenés megállapítása céljából egy „minden vagy semmi” kiértékelési módszerrel a 15. perc végén. Egy oldószeres és PGE2-es kezelési cso- 60 port szolgált minden tesztláp végén kontrollként. Az adatokat a legnagyobb valószínűség módszerét alkalmazva lineáris regresszióval analizáltuk. Egy komputer program kinyomtatja a lineáris regresszió eredményeit, beleértve 65 a szabadságfokokat, a négyzet összegeket, az 5
