194842. lajstromszámú szabadalom • Eljárás benzoxazin-2-onok-előállítására
194842 Q = 6- [4- (4-Bifenil-szulfonimidoil).-butoxi] - -4,4-dimetil-4H-3,l -benzoxazin-2-on, R = 6- [4-(3,4-Dimetoxi-N-acetil-fenil-szulfonimidoil) -butoxi] -4,4-dimeti!-4H-3,l-benzoxazin-2-on, S = 6- [4- (3,5-Di- (tere. but il) -4-hidroxi-N-acetil-fenil-szul fon imidoil) -butoxi] -4,4- -dimetoxi-4H-3,l -benzoxazin-2-on, T = 7-Bróm-4,4-dimetil-6- [4- (4-metil-fenil-szulfonimidőiI ) - butoxi] -4H-3,1-benzoxazin-2-on, U = 7-Klór-4,4-dimetil-6- [4- (4-metil-fenil-szulfinil)-butoxi] -4H-3,1-benzoxazin-2--on és V = 7-Bróm-6- [4-(3,4-diklór-fenil-szulfinil)-butoxi] -4,4-dimetiI-4H-3,l -benzoxazin-2-on 1. PDE-gátlás: Elv: A cAMP-t a különböző forrásokból így a vérlemezkékből származó foszfordiészteráz (PDE) AMP-vé hidrolizálja. Ezt a hidrolízist a PDE gátlókkal koncentrációfüggően inhibitáltuk. Módszer: Foszfor-diészterázként humán vérlemezkéknek 10000 x g nél felül úszó részét használtuk, amit vízzel befagyasztottunk, majd újból felolvasztottuk. 0,3 ml elegyet, ami 0,1 mól/1 triszhidroxi-amino-metánt (pH 7,4), 3 mmól/1 magnézium-kloridot, 1 mmól/1 AMP-t, 1 p.mól/1 3H-cAMP-t (fajlagos aktivitás kb. 10 MBq/ /pmól), PDE-t valamint a vizsgálandó vegyületet, illetve kontroll esetén vizet tartalmazott, negyedóra hosszat 37°C-on inkubáltuk Az inkubációt 0,5 ml cink-szulfát-oldat (0,266 mól/1) és 0,5 ml bárium-hidroxid-oldat (0,226 mól/1) hozzáadásával leállítottuk, a csapadékot lecentrifugáltuk és az átalakulatlan 3H-cAMP-nek a felülúszóban megmaradó aktivitását meghatároztuk. A hatóanyag-keverékeknek a kontroll keverékekkel való összehasonlításával határoztuk meg a mindenkori hatóanyagnak azt a koncentrációját, ami 50%-os gátlást okoz (IC50) : 11 Vegyület ICçjq /^umól/1/ A 0,24 B 0,23 C 0,13 D 0,21 E 0,078 P 0,042 G 0,077 H 0,18 I 0,11 12 Vegyület IC^q /yamól/l/ K 1,5 L 0,24 M 0,066 K o ,065 0 0,20 i P 0,056 Q 0,0068 R 0,71 S 0,077 T 0,001 U 0,0034 V 0,0038 2. Thrombus elleni hatás Módszer A vérlemezkék aggregációját Born és Cross [J. Physiol. 170, 397 (1964)] módszerével egészséges kísérleti személyek vérlemezkékben gazdag plazmájában határoztuk meg. Alvadásgátlás céljából a vért 3,14%-os nátrium-citrát-oldattal 1:10 térfogatarányban hígítottuk. Kollagén által indukált aggregáció A vérlemezke-szuszpenzió optikai sűrűségcsökkenésének lefutását az aggregációt kiváltó anyag hozzáadása után fotometriásan mértük és regisztráltuk. A sűrüséggörbe hajlásszögéből következtettünk az aggregáció sebességére. A görbének az a pontja,amelynél legnagyobb a fényáteresztőképesség, az optikai sűrűség („optical density“) kiszám tására szolgál. A kollagén mennyiségét a lehető legcsekélyebbre választottuk de úgy, hogy irreverzibilisen lefutó reakciógörbe adódjon. A Hormonchemie cég (München) kereskedelmi kollagénjét használtuk. A kollagén hozzáadása előtt a plazmát a hatóanyaggal 10 percen át 37°C-on inkubáltuk. A mérési eredményekből az EC50 értéket grafikusan határoztuk meg, ami az optikai sűrűség 50%-os változására, azaz az aggregéció gátlására vonatkozik. A következő táblázat mutatja a talált ékeket: Vegyület EC50 /yumól/1/ A 0,34 B 0,28 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
