194739. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cotinus coggygria kivonat készítésére cotinus coggygria hajtásvégből és levélből
1 194 739 2 A találmány tárgya eljárás gyógyhatással rendelkező kivonat előállítására Cotinus coggygriából (cserszömörce). A kivonat az ismert, kereskedelmi forgalomban beszerezhető kivonatoknál lényegesen nagyobb fokú antibakteriális hatással rendelkező szer. A Cotinus coggygria (cserszömörce) ismert gyógynövény [izsépi, Gyurkó: Gyógynövények, Búvár Zsebkönyvek 1979. 79. oldal, Rápóti-Romváry: Gyógyító növények 1980. 683. oldal]. Szovjet szerzők [646991 lajstromszámú szovjet szabadalmi leírás, CA., 90, 19240lj] flavonoidtartalmú kivonatot készítettek, míg más szerzők a cserszömörce cserzőanyag-tartalmát vonták ki [Lányi Gy.: Egészségügyi Közlöny 70(10), 156. oldal, (1960); Izv. Visokikh. Uchebn., 8. 511. oldal, (1965), CA., <53 16604h; Klim Farm. Zhur. 15, 68. oldal, (1981), CA., 96 65200s.]. Az ismert cserszömörce-kivonatok antibakteriális hatása igen csekély vagy nincs is ilyen hatásuk. Azt találtuk, hogy a találmány szerint igen jelentős antibakteriális hatással rendelkező cserszömörce-kivonat állítható elő, amely cserzőanyagból és flavonoidokból áll, s megfelelő hígításban főleg a száj-, torok-, gége- és fiilgyulladással járó hurutos megbetegedéseknél alkalmazható sikerrel. Ez az eredmény a szakember számára nem volt előre elvárható, miután a kereskedelmi forgalomban beszerezhető cserszömörce-kivonatok nem vagy igen csekély mértékben mutatnak antibakteriális hatást. A találmány értelmében Cotinus coggygria kivonatot készítünk Cotinus coggygria drog júliusban, illetve szeptemberben, október elején vágott hajtásvégéből és leveleiből - ahol az ágak és levelek aránya 30:70 tömegrész körüli -, legfeljebb 50 °C-on végzett szárítás, őrlés, vízzel elegyedő szerves oldószerrel vagy annak vizes oldatával történő kivonatolás, az oldószer lepárlása, a visszamaradó vizes oldat vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel történő extrahálása és a szerves oldószeres oldat bepárlás útján, oly módon, hogy a) a drog őrleményét 1:1 tömegarányban vízzel hígított acetonnal extraháljuk 10-50 °C, előnyösen 20-30 °C közötti hőmérsékleten, a vizes-acetonos oldatot szüljük, majd vákuumban, legfeljebb 50 °C-on az acetont ledesztilláljuk, a visszamaradó vizes fázist - kívánt esetben apoláros szerves oldószerrel, előnyösen dietiléterrel, petrol-éterrel vagy extrakciós benzinnel extraháljuk -, ásványi sav, előnyösen kénsav hozzáadásával 1-3 közötti, előnyösen 1,8-2,2 közötti pH-értékre állítjuk be és etil-acetáttal extraháljuk, az etil-acetátos fázist nátrium-szulfáttal vagy más ismert szárítószerrel vízmentesítjük és az etil-acetátot ledesztillálva kapjuk meg az I. hatóanyagot, ezt követően az etilacetátos extrakció után visszamaradó vizes fázist ammónium-szulfáttal telítjük, a kisózott anyagot acetonos kikeveréssel extraháljuk, az acetonos fázist bepároljuk, a maradékot etil-alkoholban felvesszük, szűrjük, és bepárlás után a II. hatóanyagot kapjuk; vagy b) a drog őrleményét 1:1 tömegarányban vízzel hígított acetonnal extraháljuk 10-50 °C, előnyösen 20-30 °C közötti hőmérsékleten, a vizes acetonos oldatot szűrjük, majd vákuumban, legfeljebb 50 °C-on az acetont ledesztilláljuk, a visszamaradó vizes fázist konyhasóval telítjük, etil-acetáttal extraháljuk, az etil-acetátos fázist ismert szárítószerrel víztelenítjük, az I. hatóanyagot kloroform hozzáadásával kicsapjuk és elkülönítjük, az etil-acetátos extrakció után visszamaradó vizes fázist bepároljuk, a maradékhoz etil-alkoholt adunk és az oldatot - célszerűen szűrés után - betöményítve a II. hatóanyag oldatát kapjuk. A kiemelkedő tulajdonságok a találmány szerinti eljárás speciális lépéseinek következtében jelennek meg hatóanyagban. Az I. hatóanyag 35% gallotannint, 22% flavonoidot, 14% metadigalluszsavat, 13%galluszsavat, a II. hatóanyag 6% galluszsavat, 40% galluszsav-polimert és 43% galluszsavból és szénhidrátból képződő azonosítatlan anyagot tartalmaz, standardhoz viszonyítva denzitometriás mérések alapján. A polimerizált termékben a galluszsavszármazékhoz feltehetően flavonoid típusú vegyület kapcsolódik, mely a kiemelkedő hatás hordozója lehet. Eljárásunk egyik igen lényeges vonása, hogy a műveletek során hatóanyag-veszteség gyakorlatilag nem lép fel. Az acetonos rázadékban kimutatható szárazanyag-tartalom 95-96%-a, cserzőanyag-tartalom 95-96%, a flavonoidtartalom 95-96%-a megtalálható a kivonatban. Vizsgálataink szerint a kitermelés valószínűleg az etil-acetátos extrakciónál alkalmazott pH-val áll összefüggésben. Az acetonos extraktum besűrítése után visszamaradó vizes sűrítmény saját pH-ja 4-4,5. Meglepő módon a vizes sűrítmény pH-ját csökkentve a kinyerhető gallotannin mennyisége egy bizonyos mértékig jelentősen növekszik. Az alábbi táblázattal mutatjuk be eredményeinket (az etil-acetátos extraktum százalékos gallotannin-tartalmát adjuk meg). pH gallotannin% 4,5 1,52 4 . 1,60 3,5 1,67 3 1,77 2,5 1,90 2 2,002 1 2,00“ Ezért sok esetben célszerű az etil-acetátos extrakció előtt 1-3 közötti pH-érték beállítása. Az etil-acetátos kirázás után visszamaradó vizes oldat tartalmaz még további hatóanyagot, amely száraz, porszerű alakban vagy vizes-etanolos oldatban nyerhető ki. Kívánt esetben a hatóanyag ballaszttartalma egyszerű úton csökkenthető (ballaszt a hatás szempontjából szerepet nem játszó klorofill és gyanta). Ebből a célból az acetonos-vizes kiáztatás és az aceton lepárlása után nyert vizes oldatot apoláros oldószerrel, mint éter, petroléter, extrakciós benzin, kloroform stb. kivonatoljuk. Éteres kivonatolás esetén az összes szárazanyagtarta■omra vonatkoztatva a veszteség 4,1% mely zömében a ‘entebb említett ballasztanyagokat tartalmazza. A hatóanyag-veszteség elhanyagolható, cserzőanyagra vonatkoztatva 4,2-4,3%, flavonoidtartalomra vonatkozatva 4,8-4,9%. A találmány szerinti eljárással nyert I. és II. hatóanyagot különállóan vagy tetszés szerinti arányú keverékeik alakjában használjuk fel gyógyhatású cseppek, például fiilcsepp vagy orrcsepp készítéséhez. Előnyösnek találtuk fiilcsepp céljára, ha az 1. példa szerinti hatóanyag-keverékből 70%-os vizes etanollal 3%-os oldatot készítünk, amely 1-2% bórsavat is tartalmaz. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
