194496. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Marek-kór elleni élő vakcina előállítására
9 194 496 10 ties fejlesztett ki (BMD03S, 1964. június 1-i változat). További információkat ad meg ennek a statisztikai módszernek az alkalmazásáról a következő irodalmi hely: Journal of Biological Standardization 9,15-22 (1981). Az említett számítógép-program lehetővé teszi a vizsgálati eredmények probit-analízisét és a probit regressziós vonalak meredekségének meghatározását. A PD50-et patológiás tünetek alapján számítjuk ki a vizsgálati állatoknak abban a részében, amely MD-fogékonysággal bír. A természetes rezisztenciát a kontroll csoportban fejezzük ki. A védő hatékonysági tanulmányok a CVI-988 MDV-törzsből nyert különböző vírus-klónokkal (nem „C” kiónokkal) a következő eredményeket adják. CVI-988 CEF55 MDV „A” klón: Az „A” klón védőhatékonysága nagyon gyenge. A PD50 kísérletek lapos dózisválaszvonalat adnak, 100 illetve 500 FFU vírusdózisoknál a vizsgált 40 csirkéből 19 illetve 7 csirke szerez védelmet MDV-K fertőzés ellen. CVI-988 CEF55 NDV „B” klón: A CEF-hez adaptált „B” klónnal végrehajtott PD50 kísérlet 31,9 FFU-értéket ad, amely szignifikánsan nagyobb, mint a CVI-988 CEF59 MDV „C” kiónnál nyert PDS0 érték (p < 0,05). CVI-988 CEF59 MDV „C” klón: A CEF-hez adaptált „C”’ klónnal végrehajtott PD50 kísérlet 41,6 FFU-értéket ad, amely szignifikánsan nagyobb, mint a CVI-988 CEF59 MDV „C” klónnal nyert PD50 érték (p < 0,05). CVI-988 DEF97 MDV „D” klón: Ez a „D” klón túlgyengítettnek mutatkozik. Viszonylag kisszámú csirkét véd meg az MDV-K-fertőzés ellen. Az ártalmatlansági és védőhatékonysági tanulmányokra alapozva azt a következtetést lehet levonni, hogy a CVI-988 MDV „C” klón a legjobb jelölt egy Marek-kór vakcina kifejlesztéséhez. A találmány szerinti vírus-klón védő hatékonyságát a IV-VIII. példákban mutatjuk be. IV PÉLDA CVI-988 DEF51 MDV „C” klón immunogenicitásának meghatározása a CVI-988 CEF35 MDV-vel és HVT FC 126-tal összehasonlítva. Ebben a vizsgálatban egy jelen találmány szerinti víruskészítmény, a CVI-988 DEFj, MDV „C” klón immunogén aktivitását hasonlítjuk össze két, a gyakorlatban széles körben alkalmazott készítményével (CVI-988 CEF35 MDV és HVT FC 126). Ebből a célból meghatározzuk a PDS0-et, amely azt az FFU-számot jelenti, amely csirkék egy csoportja MD-fogékony része 50%-ának megvédéséhez szükséges az MD klinikai tüneteitől és/vagy makroszkópos elváltozásaitól. A fertőzést GA-5 virulens MDV-klónnal [Journal of the National Cancer Institute, 51, 929-939 (1973)] végezzük. White Leghorn „A” törzsbe (WLA) tartozó SPF- csirkéket alkalmazunk. A vizsgálati csirkék különböző csoportjait módosított Horsefall-Bauer-izolátorokban tartjuk. Az egyes adagolási csoportokba tartozó csirkéket két izolátorba osztjuk szét. A madarakat ad libitum táplálják forrázott takarmánnyal. Az inokulálás után a víruskészítményt tarfolt-titrálásnak vetjük alá CEF-ben vagy DEF-ben. A csirkéket az MD klinikai tüneteire vizsgáljuk. Ez alatt az időtartam alatt az elhullott vagy megbetegedett csirkéket eltávolítjuk az izolátorokból. A vizsgálati időtartam végén az öszszes megmaradó madarat átvizsgáljuk az MD tüneteire. A 2. táblázat mutatja be az MD klinikai tüneteit és/vagy makroszkópos elváltozásait mutató csirkék számát és a vizsgálati állatok számát dóziscsoportonként. A vizsgált víruskészítmények mindegyike ad védelmet a GA-5 MDV-vel végzett intramuszkuláris fertőzés ellen, a legnagyobb vírusdózis a leghatásosabb. A három vizsgálatból nyert adatok probitanalízise lehetővé teszi a PD50 értékek kiszámítását 14 és 33 FFU- egységek között. Nem voltak szignifikáns különbségek megfigyelhetők a három vizsgált víruskészítmény PD50 értékei között. 2. TÁBLÁZAT Három PD50 mérés összehasonlítása, amelyet CVI-988 DEF51 MDV „C” klónnal, CVI-988 CEF35 MDV-vel és HVT FC 126-tal végzünk. Vakcina CVI-988 DEF51 CVI-988 CEF35 HVT FC 126 MDV „C” klón MDV Fertőző vírus GA-5 GA-5 GA-5 Legnagyobb dózis (FFU) 1000 500 500 Sorozathígítások lépésekben A megvédettek száma/összes szám 1:5 1:5 1:5 Legnagyobb dózis: 28/30 24/27 30/31 29/32 21/24 30/32 25/31 18/26 21/31 Legkisebb dózis: 12/32 9/23 8/32 9/32 Vakcina nélkül: 3/32 5/22 4/28 PDso* PDjo 95%-os konfidencia 33 14 14,7 intervalluma A probit regreszsziós vonal 16,5-66 4,4-44,9 6,7-32,1 meredeksége A meredekség 1,07 0,87 1,50 standard hibája 0,18 0,23 0,27 * Az MD-re fogékony csirkék 50%-ának védelméhez szükséges FFU száma. V PÉLDA Ugyanazt a vizsgálatot, mint a IV. példában, hajtjuk végre a találmány szerinti CVI-988 DEFS4 MDV „C”’ klónnal és CVI-988 CEF54 MDV „C” klónnal, összehasonlítva a CVI-988 CEF35 MDV-vel és a HVT FC126 + MDV SB-1 keverékkel. A fertőzést virulens MDV-K-val hajtjuk végre. Az eredményeket a 3. táblázatban adjuk meg. VI. PÉLDA Ugyanazt a PDS0 meghatározást végezzük el, mint amelyet a IV. és V. példáknál leírtunk, három, találmány szerinti víruskészítménnyel, CVI-988 DEF54 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
