194493. lajstromszámú szabadalom • Eljárás primicin tartalmú, kolloid állapotú alapgél és az azt tartalmazó készítmények előállítására
1 194 493 2 A találmány tárgya eljárás primicin-tartalmú, kolloid állapotú alapgél és az azt tartalmazó új készítmények előállítására. A primicin makrolid antibiotikum, amelyet az irodalom (J. Chem. Soc., Perkin 1.1974.816 p.) egyetlen képlettel jellemez: /5-/18-/a-D-arabinofúranozyloxy/-2- butyl-3,7,ll,15,19,21,23,25,27-nonahidroxi-4,16,32,34- tetrametil-l-oxo-oxaciklohexatria-konta-16,32-dién- 35-il/-4-hidroxihexil/guanidinium-szulfát. Bár a szakirodalom egyetlen képlettel írja le a szerkezetét, ismert, hogy több komponensből álló antibiotikum-komplex (T/39186 T/39187 k. sz. magyar szabadalmi bejelentések). A primicin a Thermopolyspora galeriensis gombatörzs tenyészetéből származó természetes antibiotikum, fermentációs úton történő előállítását a 153.593 1. sz. magyar szabadalmi leírás ismerteti. A primicin széles spektrumú, elsősorban Gram pozitív baktériumok ellen hatékony antibiotikum, amely a polirezisztens humánpatogén törzsekre is hatásos. Rezisztencia eddig még nem alakult ki ellene. Más antibiotikumokkal együtt adva szinergetikus hatású (158.241 1. sz. magyar szabadalmi leírás). Előnyösen alkalmazható bőrgyógyászatban, sebészetben, szemészetben, urológiában, nőgyógyászatban, tüdőgyógyászatban, háztartási sérüléseknél, égési sérülések ellátásánál. Külön ki kell emelni alkalmazhatóságát bőrgyógyászatban, acne vulgáris kezelésére. A primicin rendkívül rossz oldhatósága igen megnehezíti a gyógyászati alkalmazását, nehéz olyan formát kidolgozni, ami az anyagot biológiailag hozzáférhetővé teszi. Ezen próbált segíteni a 173.708 1. sz. magyar szabadalmi leírásban ismertetett eljárás, amely szerint vizes-alkoholos közegben 0,2% primicin-tartalmú stabil heterokolloidot képeznek. Az így előállított primicin-tartalmú heterokolloidnak két alapvető hiányossága van: egyrészt az oldószer elpárolgása után a benne található hatóanyag biológiailag nem hozzáférhető, másrészt nem érhető el 0,2%osnál nagyobb koncentráció. Ez behatárolja alkalmazhatóságát, mivel a hasonló célú antibiotikum tartalmú készítményekben, különösen acne vulgaris kezelése esetén, általában 1-2% közötti koncentrációban alkalmazzák a hatóanyagot. A magas alkoholtartalma pedig - tartósan alkalmazva - a bőrt károsítja. Célul tűztük ki, hogy a primicinnek olyan alkalmas formáját állítsuk elő, melyből a célnak legjobban megfelelő gyógyászati és/vagy gyógykozmetikai készítmények állíthatók elő. A találmány szerinti eljárásunk meglepő felismerésen alapszik, mely lehetővé teszi, hogy a primicinből 0-30% közötti koncentrációhatárok között bármilyen forma előállítható legyen. Meglepő módon azt találtuk, hogy a primicint N- metil-pirrolidon-2 oldószerben oldva, stabil szerkezetű alapgélt kapunk, melyből az eddig ismert koncentrációknál sokkal nagyobb koncentrációjú primicin-hatóanyag vihető be különböző készítményekbe. Felismertük, hogy 100 ml N-metil-pirrolidon-2-ben 5-30 g primicint 100 °C-on oldva, lehűtés után stabil gélt kapunk, ami akár közvetlenül felhasználható, akár bármilyen szokásos készítményhez (gél, kenőcs, habspray, szolució) kiinduló anyagul szolgálhat. Az N-metil-pirrolidon-2 a kozmetikai készítményekben gyakran alkalmazott oldószer, azt az előnyét használják, hogy kevéssé toxikus és vízzel, organikus oldószerekkel, zsírokkal korlátlanul elegyedik. Ez a tulajdonsága teszi különösen alkalmassá primicin-tartalmú gyógyászati készítmények előállítására is, mert az előzőekben leírt gélt bármilyen oldószerrel, adalékanyaggal formulázva felhasználás közben az oldószer elpárolgása vagy felszívódása után visszaáll az eredeti gélszerkezet, ami a vizes és lipid biológiai fázisok közötti primicin penetrációt igen jól elősegíti. A leírt spontán gélképzés csak a primicin és az N-metil-pirrolidon-2 kölcsönhatására jellemző. Nem képez a primicin stabil gélt metanollal, etanollal, izopropanollal, n-butanollal, izobutanollal, diklórmetánnal, kloroformmal, széntetrakloriddal, etilacetáttal, acetonitrillel, n-hexánnal, benzinnel, benzollal, toluollal, petroléterrel, éterrel, dimetilformamiddal, dimetilszulfoxiddal, izopropilmirisztáttal. Másrészről az N-metil-pirrolidon-2 nem képez gélt az alábbi gyógyászatban használt vegyületekkel: doxyciklin, gentamicin, oxolinsav, nalidixsav, drotaverin, teofillin, acetilszalicilsav, papaverin, indometacin. A primicin, illetve N-metil-pirrolidon-2 specifikus kölcsönhatásának oka egyrészt az oldhatóság hőmérsékletfüggése (0 °C-100 °C között több mint két nagyságrend) másrészt a primicin több komponensű összetétele. A gélképzés nem változtatja meg sem a primicin kémiai összetételét, sem a mikrobiológiai aktivitását. A kiinduló anyagul használt 20%-os gélnek 5 órán át 100 °C-on tartás, illetve 1 hónap szobahőmérsékleten állás vagy 1 hónap +5 °C-on történő tárolás hatására sem a gélszerkezete, sem a kémiai összetétele, illetve a mikrobiológiai aktivitása nem változik. Megvizsgáltuk a primicinalapgél (20% primicin+80% N-metil-pirrolidon-2) antibakteriális hatását, összehasonlítva a fermentációs úton előállított primicin-szulfát antibakteriális hatásával. Azt tapasztaltuk, hogy a hatóanyagokat sztöchiometrikus arányban összehasonlítva, antibakteriális hatékonyságuk között nincs különbség. Az antibakteriális hatás: Minimális gátló koncentráció (továbbiakban MIC) és minimális baktericid koncentráció (továbbiakban MBC) mérése Staphylococcus törzseken. Alkalmazott mikroorganizmusok: klinikai anyagból izolált 100, -(50 Staphylococcus aureus, - 50 Staphylococcus epidermidis) törzs. Alkalmazott mérési módszerek: a) MIC-meghatározás: lemezhígításos módszerrel, módosított Mueller-Hinton (HUMÁN) agaron, 5% marhavérrel komplettálva. Az inokulálás a törzsek 18 órás levestenyészetének 104-szeres hígításából, 0,025 ml-nyi mennyiségével történt. MIC-értéknek azt a vizsgálati anyag hígítást vettük, ahol a növekedés gátlása 90-95%-os volt. b) MBC-meghatározás: az agarlemezekről vizsgálati anyagmentes táptalajra lenyomatot készítettünk, majd a telepképzők számát újra meghatároztuk. A vizsgálati anyagok koncentrációja 200,0 mg/liter volt, ebből készítettük a hígítási sort felező hígítással. Az érzékenységi vizsgálatok értéktartománya 0,01-20,0 mg/liter volt. A vizsgálatok elvégzésekor meghatároztuk, hogy a vizsgált törzsek hány %-a érte el a MIC-, illetve MBC-értéket a vizsgálati anyag adott koncentrációja mellett. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
