194313. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új alfa-glüközidáz inhibitor és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 104 313 2 juk meg. Fermentálhatunk például 10-40°C-on, előnyösen mintegy 20-35°C-on. A tápközeg pH- értékét olyan értéken tartjuk, amely a mikroorganizmus növekedése szempontjából kedvező, például 4,0 és 10,0 közötti érték, előnyösen 6,0 és 9,0 közötti érték. A tápközeg minőségi és mennyiségi összetételétől, a tenyésztés körülményeitől, így a szellőztetés mértékétől, a hőmérséklettől és a pH- értéktől függően az A 5662 jelű inhibitor mintegy 1-10 nap alatt keletkezik a tápközegben. Az A-5662 jelű inhibitor mind a micéjiumban, mind a tenyészíében jelen van, a főtömeg általában a szürletben van. Ezért előnyösen a vizes fázist például szűréssel vagy centrifugálással elválasztjuk a micéliumtól, és a kívánt terméket ismert módon izoláljuk és tisztítjuk. Erre számos eljárás alkalmas, így például ioncserélős kromatográfía, molekulaszűrő, adszorbeáló gyanták, oldószerekkel vagy sókkal végzett kicsapás, ultraszűrés, Craig-elosztás stb. Az A-5662 jelű inhibitor kinyerésére előnyösen úgy járunk el, hogy alkalmas gyantához, például polisztirol bázisú gyantához adszorbeáltatjuk az inhibitorokat a tenyészléből, majd később alkalmas puffer-oldattal, így például foszfát- vagy nátrium-acetát-pufferrel, vagy adott esetben vizet tartalmazó szerves oldószerrel (metanol, etanol, aceton, előnyösen vizes izopropanol) eluálva izoláljuk. Az inhibitort tartalmazó eluátomokat ismert módon ultraszűréssel törnényítjük, egyidejűleg sómentesítjük. Az inhibitorok vizes, ionokban szegény oldatát ioncserélő gyantával töltött oszlopon ismert módon szétválasztjuk komponenseire. Gyantaként előnyösen erősen vagy gyengén savas kationcserélő gyantát, például sztriol-divjnilbenzol-kopolimer bázisút alkalmazunk, amely funkcionális csoportként —SG3H vagy -COÓH csoportokat tartalmaz (Dowcx 50 W) (Amberlite CG 120), vagy módosított szulfopropilbázisút (SP Sephadex), de a kereskedelmi forgalomban levő számos ioncserélő gyanta szintén alkalmas. A kinyerés utolsó lépése a molekulaszűrő, például poliakrilamid-gél bázisú molekulaszűrő (Biogel P-6) vagy módosított cellulóz bázisú molekulaszűrő (Sephadex) alkalmazása. Az 1100 Dalton körüli frakciók összegyűjtésével nyeljük az A 5662 jelű inhibitort. Előfordulhat, hogy a kapott anyag még kis mértékben szennyeződéseket tartalmaz. Ilyen esetekben hasznos, ha lÚesclgélen még utótisz.títást végzünk, mégpedig célszerűen n propanol, etilacctát. víz és jégecet 6:1 : 3 : 0,5 arányú elegyével. Az inhibitort tartalmazó eluátumokat egyesítjük, vákuumban betóményítjük, majd fagyasztva szárítjuk. Az így kapott anyag fajlagos aktivitása 4x10* a amiláz inhibitor egység, 1 mg szilárd termékre vonatkoztatva. A tiszta Inldbitor színtelen, amorf pszeudooligoszacharid. Nitrogént tartalmaz, kémhatása enyhén lúgos, például savas pufferrel, Így például vizes hangyasav/ccetsav clegyekkel végzett nagyfeszültségű vizes hangyasavjecetsav elegyekkel végzett nagyfeszültségű elcktroforézisben az inhibitor a katód irányába vándorol. Az új inhibitor kötött glükózt tartalmaz, savas hidrolízis esetén glükóz mellett többnyire nitrogén-tartalmú bomlási termékek keletkeznek. További jellemzőjük a redukáló képesség, amelyet - mint ahogy a cukorkémiában szokás — például trifenll-tetrazolium-kloriddal (TTC) kimutathatunk, Az új vegyületre az (I) képlet jellemző. Az anyag vízben könnyen oldódik. Az ultraibolya fényben, 400-210 nm között vizes oldatban felvett abszorpciós színkép a kisebb hullámhossznál mutat abszorpciót. A KBr-ban felvett IR-színképet a csatolt rajzon mutatjuk be. Az Irodalomban már több pszeudoollgoszacharid jellegű a-gjükozldáz-inhlbitort Ismertettek (E. Truscheit és társai, Angew. Chem. 93, 738-755. o. (1981), T. Tajiri és társai, Agrlc. Blol. Chem. 47, 671-679 (1983), K. Yokose és társai, J. Antibiotics 36, 1157-1175(1983).) A találmány szerint előállítható Inhibitor azonban a redukáló tulajdonságai, valamint az (I) képlet révén az összes ismert a^glükozidáz-inhibi tortól különbözik, tehát új anyagról van szó. Az új anyag mikrobiológiai úton jó hozammal állítható elő. A találmány szerint előállítható inhibitor tulajdonságai főleg a cukorbetegség és előzményeinek kezelése, a beteges elhízás kezelése és a diétás étrend segítése szempontjából érdekes. Ugyanezek miatt a tulajdonságok miatt a pszeudoollgoszacharid diagnosztikai célú reagensként is alkalmas. Keményítőtartalmú élelmiszer mind az emberi, mind az állati szervezetben a vércukorszint növekedését és így a hasnyálmirigy fokozott inzulintermelését eredményezi. A hiperglikémla oka, hogy a gyomor-bél-rendszerben az amiláz és_ maltáz hatására a keményítő glükózzá bomlik. Cukorbetegeknél a hiperglikénda különösen erős, hosszantartó. A keményítő felvétel utáni alimentáris hiperglikémla, valamint a hlperinzulinémia a találmány szerint előállított amfláz-inhibitor segítségével csökkenthető. Ez a hatás a dózistól függ. Az új inhibitor ezért cukorbetegség, előzményei, beteges elhízás és a diétás étrend segítése céljából alkalmazható. Az orális beadás előnyös, ajánlatos étkezéskor szedni az, 5—500 mg egyszeri dózist, amelyet a beteg súlyától és egyedi szükségleteitől függően kell megállapítani. A dózis indokolt esetekben nagyobb, vagy kisebb is lehet. A találmány szérint előállított amiláz-inhi'jitor különösen az, orális applikációra alkalmas. Adagolhatjuk a hatóanyagot önmagában, savaddiciós sói alakjában vagy a szokásos hordozó- és segédanyagokkal készített gyógyászati készítmények formájában. Az is lehet előnyös, hogy az új hatóanyagot egyéb gyógyszerekkel, például a vércukorszintet csökkentő vagy a Hpids/.intet csökkentő anyagokkal együtt kombináltan alkalmazzuk. Tekintettel arra, hogy a nagyobb molekulasúlyú szacharidok a gyomor-bélrendszerben egyáltalán nem vagy csak kevéssé szívódnak fel, az új Inhibitornak nem lehetnek toxikus mellékhatásai. Ennek megfelelően még p. o. alkalmazva Igen nagy adag amilázinhlbitorral kezelt kísérleti állat esetén sem lehetett semmilyen tünetet észlelni. Az amiláz-inhlbitor farmakológia! hatásának kimutatása céljából éheztetett, híinneinű, 200-250 g testsúlyú Wistar-patkányoknak 1 kg-ra számítva 2 g keményítővel együtt A-5662 inhibitort adtunk be orálisan. Az inhibitor adagolása előtt, alatt és után vett vérminták cukorszlntje kimutatja a készítmény hatását. A vércukorszint szabályozásán kívül az új inhibitor a nyálban lévő a-amfláz enzim gátlására is alkalmas. Ez az enzim a szájüregben bontja a keményítőt cukorrá, és az ott keletkezett cukor a fogszuvasodást 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
