194310. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új TAN-588 antibiotikum alkálifém-, alkáliföldfém-, ammóniumsójának és N-dezacetilezett-származékának előállítására
1 194310 a fúlyi keveréke alakul ki, amelyben A : B közel 1:1. A jelenleg ismeretes elválasztási technikákkal a TAN-588 A és B típusa nem választható szét. Megjegyezzük azonban, hogy a TAN-588 alkálifém-, alkáliföldfém- vagy ammóniumsóját p-nitro-benzil-észter vagy benzhidril-származékká alakítva az A és B típus elválasztása lehetővé válik. Az 1. példában ismertetett eljárással előállított TAN-588 antibiotikum ndtriumsóiának (A és B típus egyensúlyi keveréke) fiziko-icémiai tulajdonságai a következők: 1) Külső forma: fehér por, 2) Fajlagos forgatás: [ajq -19,0° b± 10e (c = 0,5 vízben) 3) Elem-analízis: (a mintát előzetesen 40°C hőmérsékleten 6 órán át foszfor-pentoxid felett szárítottuk) talált: számított:1" C% 38,5 ±2,0 C% 39,61 H% 4,5 ±1,0 H% 3,99 N% 9,1 ± 1,5 N% 9,24 0% 39,58 Na% 6,9 ± 1,5 Na% 7,58 * = a számított értéknél 0,5 mól kötött vizet is számításba vettünk. 4) Kötött víztartálom (termogravimetiás módszerrel meghatározva): 3,0 ± 1,5%. 5) SIMS módszer szerint meghatározott molekuláris ion csúcs i m/e 611 (2M ♦ Na)+, 317 (M + Na)\ 295 (M ♦ H)* 6) összegképlet:CioH!!N207Na 7) Ultraibolya sugárzás abszorpció (UV spektrum, vízben): l.ábra 130) 8) Infravörös spektrum (felvétel KBr-ban) IR spektrum (2. ábra) alapján a jellemző abszorpciós maximumok a következők: 3450, 1780, 1730, 1660, 1550, 1385, 1320, 1290, 1260, 1200, 1120, 1040, 980, 810, 770, 690, 600, 540 cm'1 9) MNR-spektrum (100 MHz, D2Oban) jellemző csúcsok: 182,02(s), 177,30(s),-173,79(s), 173,30(s), 173,25(s), 172,58(s), 96,97(s), 96,92(s), 74,27)t), 72,68(t), 55.75(d), 55.34(d), 3l,92(t), 31,08(t), 30,98(t), 24,58(q), ppm (aiiol s = szingulett d = duplett, t = triplett és q * kvartett) 10) Dikroizmus (CD) spektrum (vízben): negatív Cotton effektus 232 ± 3 nm-nél 11) Oldhatóság: oldódik vízben, dimetil-szulfoxidban, enyhén oldódik etil-acetátban, kloroformban, dietil-éterben 12) Színreakció: pozitív: Ninhidrin reakció negatív: Greig-Leaback reakció, Sakaguchi reak- Ehrhch reakció, Barton reakció, Dragendorff s reakció, 13) Amínosav-analízis 6 n sósav-oldattal, 105°C hőmérsékleten, 20 órán át hídrolizálva szerint mutatható ki: 14) Stabilitás: vizes oldatban pH 5 érték mellett - stabil, pH 3 és 7 érték mellett - enyhén stabil, PH 9 érték mellett - nem stabil, 15) Vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat réteg: Cellulose f (gyártó cég: Tokyo Koséi Co., Japán) Oldószer-rendszer Rf érték Acetonitril : víz (4 :1) 0,33 Butanol: ecetsav : víz ( 1 : 1 :1) 0,77 Acetonitril: 3% ammónium-szulfát (4 : 1) 0,28 16) Savas, neutrális, bázikus jelleg : neutrális, 17)Nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat: töltet: YMC A 312 (gyártó cég: Yamamura Chemical Laboratories, Japán) mozgófázis: 4% metanol/0,01 M foszfát-puffer (pH 6,3), 2 mlfperc. Rt = 4.3 és 4,8 perc. A fiziko-kérruai tulajdonságok és az eljárási reakció alapján megállapítottuk, hogy a TAN-588 molekulájában egy karboxilcsoport és egy nitrogénatomhoz kapcsolódó acetilcsoport van. Az I. táblázatban összefoglaljuk a TAN-588 nátriumsójának antibakteriális hatását különböző mikroorganizmusok ellen. Táptalaj összetétele: 17,5 g Bacto Antibiotic Medium 3 (gyártó cég: Difko Laboratories, USA) 5.0 g Bacto Yeast extract (élesztőkivonat) (gyártó cég: Difko Laboratories, USA) 2.0 g Bacto Agár (gyártó cég: Difko Laboratories, USA) 1000 ml desztillált víz (pH beállítás nélkül). Baktérium oltóanyagként mi ként 106 telepképző egységet tartalmazó oldatot használunk. /. táblázat Mikroorganizmus Minimális inhibitor koncentráció /ug/ml Staphylococcus aureus FDA 209 P 3,13 Micrococcus luteus IFO 12708 0,39 Bacillus subtilis NIHJ PCI 219 3,13 Bacillus cereus FDA 5 12,5 Salmonella typhimurim IFO 12529 50,0 Escherichia coli NIHJ JC 2 50,0 Citrobacter freundii IFO 12581 100 Klebsiella pneumoniae IFO 3317 100 Serratia marcescens IFO 12648 50 Proteus mirabilis ATCC 21100 25 Proteus vulgaris IFO 3988 25 Proteus morganii IFO 3168 100 Pseudomonas aeruginosa IFO 3080 > 100 Alcaligenes faecalis IFO 13111 50 Acinetobacter calcoaceticus IFO 13006 25 A TAN-588 nátriumsójának terápiás hatását fertőzött egereken végzett vizsgálatokkal állapítjuk meg. A vizsgálatok eredményeit a 2. táblázatban adjuk meg. 2. táblázat Fertőző mikroorganizmus Beadagolás ED5 0 mg [kg módja Staphylococcus aureus 308A-I szubkután 25,0 A TAN-588 nátriumsóját 400 mg/kg dózisban szubkután beadagolva sincs toxikus hatás. A következőkben az N-dezacetilezett TAN-588 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 7
