194310. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új TAN-588 antibiotikum alkálifém-, alkáliföldfém-, ammóniumsójának és N-dezacetilezett-származékának előállítására
1 194 310 2 i) pH : az optimális pH 6-7,5 közötl tartomány van, bár a mikroorganizmusok szaporodnak 5-8 pH-érték mellett is, táptalaj : folyékony táptalaj, aminek pH-ját nátrium-hidroxiddal vagy kénsavval állítjuk be: ii) hőmérséklet: az optimális hőmérséklettartomány : 15-22°C között van, de a mikroorganizmusok 7,5-39°C hőmérsékleten is szaporodnak, táptalaj : folyékony táptalaj, 15) Oxigénigény: aerob 16) O F (oxidációs-fermentációs) vizsgálat (Hugit. Leifson módszer): nem reagál 17) Cukorból sav és gáz termelése és ezek hasznosítása Sav (vizes pepton) Gáz (vizes pepton) Hasznosítás (Davis táptalajon) 1-Arabinóz — — — d-Xilóz — — — d-Glükóz — — — d-Mannóz — — — d-Frukóz — — — d-Galaktóz — — — Maltóz — . — Szacharóz — — — Laktóz — — • Trehalóz • — — — d-Szorbit — — — d-Mannit — — — Inozit — — — Glicerin — — — Keményítő-18) A DNS-ben a guanin + citozin mól%-a (Tm módszer): 40,0 ±1,5 19) Képesség poliszacharidok bontására Karboxi-metil-cellulóz: negatív Kolloidális kitin: negatív Nátrium-alignát: ■ negatív. A fentiekben mikrobiológiai jellemzőkkel jellemzett YK-504 törzset, összehasonlítottuk a Bergey s Manuual of Determinative Bacteriology, 8. kiadás, és International Journal of Systematic Bacteriology, 30, 225-420 (1980) és 32, 146-149 (1982) irodalmi helyeken ismertetett törzsekkel. Azon jellemzők, alapján, hogy a mikroorganizmus Gram-negatív, rövid pálcika vagy gömbalakú, nem mozgékony, aerób, a cukrokból savat és gázt nem termel, oxidázokkal végzett vizsgálata negatív, a katalázokkal végzett vizsgálat pozitív, DNS-ben a guanin + citozin tartalom 40,0 ± 1,5 megállapítottuk, hogy az YK-504 törzs az Acinetobacter nemzetségbe tartozik és Acinetobacter sp. YK-504 jelzéssel jelöljük. Az Acinetobacter sp. YK-504 törzset az IFO törzsgyűjteménybe 1985. január 31-én letétbe helyeztük, IFO 14420 számon és az FR1 törzsgyűjteménybe 1985. február 12-én FERM BP-709 számon. A találmány szerint alkalmazható Empedobacter vagy Lysobacter mikroorganizmus könnyen változhat vagy módosulhat és hajlamos a mutációra, mesterséges mutációs eszközöket alkalmazó módszereket, mint például ultraibolya besugárzást, röntgenbesugárzást és kémiai szereket, úgymint nitroző-guanidint, etil-metán-szulfonsavat, stb. alkalmazva. A találmány szerinti eljárásban alkalmazhatók azok a mutánsok, amelyek a TAN-588 és/vagy N~ -dezacetilezett származékának termelésére képesek. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható Acinetobacter sp. YK-504 mikroorganizmus általában könnyen változhat vagy módosulhat és hajlamos a mutációra, mesterséges mutációs eszközöket alkalmazó módszerek, mint például ultraibolya-besugárzás, röntgenbesugárzás és különböző kémiai szerek, úgymint nitrozó-guanidin, etil-metán-szulfonsav, stb. hatására. A találmány szerinti eljárásban alkalmazhatók azok a mutánsok, amelyek a TAN-588 antibiotikum és/vagy N-dezacetilezett származékát előállító törzset nagymennyiségű N-dezacetilezett TAN-588 előállítására képesek késztetni a találmány szerinti kevert tenyészetben. A TAN-588 és/vagy N-dezacetilezett származékának termelésére alkalmas mikroorganizmus tenyésztésénél szénforrásként olyan anyagokat használhatunk, amelyeket a mikroorganizmus asszimilálni képes. így például használhatunk glükózt, fruktózt, maltózt, oldható keményítőt, dextrint, olajokat és zsírokat, úgymint szójaolajat, olívaolajat, stb. és szerves savakat, úgymint citromsavat, glükonsavat és borostyánkősavat. Hasznosítható nitrogénforrásként alkalmazhatunk szerves nitrogénvegyületeket, mint például szója-hsztet, gyapot-mag-lisztet, kukoricasikér-lisztet, száraz élesztőt, élesztő kivonatot, liszt kivonatot, peptont és karbamidot. Szervetlen sóként használhatunk önmagukban vagy megfelelő kombinációban, a mikroorganizmusok tenyésztésénél általában használatos szervetlen sókat, mint például nátrium-klorídot, kálium-kloridot, kálcium-karbonátot, magnéziumszulfátot, kálium-foszfátot és dinátrium-foszfátot. A táptalaj tartalmazhat még a fentieken kívül nehézfém-sókat, mint például vas(II)szulfátot: vitaminokat, például Bj vitamint és biotint. A táptalajhoz szükség szerint adhatunk habzásgátlókat és felületaktív anyagokat is, mint például szilikonolajat vagy polialkilén-glikol étereket. A táptalajba adagolhatunk továbbá olyan szerves és szervetlen anyagokat, amelyek a mikroorganizmus szaporodását és a TAN- 588 és/vagy N-dezacetilezett származékának termelését elősegitik. A tenyésztést az antibiotikumok termelésénél általában használatos módszerekkel végezhetjük. A tenyésztéshez akár szilárd, akár folyékony táptalajt használhatunk. Folyékony táptalaj használata esetén stacioner, rázott, merített, aerób stb. tenyészeteket alkalmazhatunk, de legelőnyösebb az aerób merített tenyészet alkalmazása. Az inkubálás hőmérséklete előnyösen 15-32°C és a tápközeg pH értéke 5-8 között van. A tenyésztést 8-16 óra — előnyösen 24—144 óra időtartam alatt végezzük. A kevert tenyésztést a TAN-588 és/vagy N-dezacetilezett származékát termelő, az Empedobacter vagy Lysobacter mikroorganizmus tenyésztéséhez hasonló körülmények között végezzük. Az N-dezacetilezett TAN-588 antibiotikum detektálását vékonyréteg kromatográfia bioautográfiás módszerrel végezzük (TCL-bioautography method) Pseudomonas aeruginosa C-141-et alkalmazva. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott kevert tenyészet, amelyben egy Acinetobacter mikroorga5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
